多形性膠芽腫に多く発現する中間径フィラメント「ネスチン」のcDNAクローニング

巢蛋白（一种在多形性胶质母细胞瘤中频繁表达的中间丝）的 cDNA 克隆

• 批准号: 05771050
• 负责人: 遠山 隆
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771050/
• 关键词: グリオーマ; ネスチン; ニューロフィラメント

1)神経上皮性腫瘍におけるニューロフィラメント蛋白の発現神経上皮性腫瘍の手術標本ホルマリン固定切片をクエン酸バッファ内で95℃、25分間煮沸し抗原賦活し、ABC法によりニューロフィラメント(NF)の各サブタイプに対する単クローン性抗体を用いて免疫染色を行った。NFの発現はニューロン系腫瘍の分化度の指標となった。GlioblastomaにおいてNF陽性腫瘍細胞が存在し、この腫瘍が単にグリア系の細胞から構成されるだけでなく、より未熟な細胞を含んでいることを示唆した。2)ENU誘発ラット脳腫瘍におけるネスチンmRNAの発現ENUの経胎盤的投与によりラットに脳腫瘍を誘発させた。発生した腫瘍は形態学的にヒトの膠芽腫や未分化神経外胚葉性腫瘍に類似していた。摘出した腫瘍より凍結切片を作製し,、これにNFのcDNAおよびネスチンoligonucleotideをプローブとしてIn Situ Hybridizationを行い,NFとネスチンのmRNAを検出した。未分化神経外胚葉性腫瘍に類似した腫瘍だけでなくGFAPが陽性の膠芽腫にもネスチンとNFのmRNAが検出された。3)ヒト膠芽腫培養細胞由来cDNAライブラリーの作製Glioblastoma細胞株U251-MGよりmRNAを抽出し,これよりcDNAライブラリーを作製した。4)単クローン性抗ヒトネスチン抗体の作製の試みラットネスチンcDNAをexpression vectorを用いて大腸菌に導入しラットネスチン蛋白を産生せしめた。これを電気溶出法により抽出し精製した。得られた蛋白をマウスに免疫し,細胞融合法を行った。産生された単クローン性抗体はELISA法又はウェスタンブロット法により,大腸菌由来ネスチンに反応するものが選択された。

1)The development of neuroepithelial lesions was studied by immuno staining of fixed sections of neuroepithelial lesions with antigen-activated ABC method, which were boiled at 95℃ for 25 minutes. NF development is an indicator of tumor differentiation. NF-positive tumor cells are present in Glioblastoma, and the tumor cells are composed of immature cells. 2)ENU mRNA expression in the placenta The morphology of the tumor is similar to that of the undifferentiated neuroectodermal tumor. In Situ Hybridization, NF cDNA and RNA were isolated from frozen sections. Undifferentiated neuroectodermal tumors are similar to those in which GFAP is positive and NF mRNA is detected. 3) Production of Glioblastoma cell line U251-MG from cDNA library 4) The production of anti-tumor antibody and cDNA expression vector in E. coli This method is called electro-stripping. The method of cell fusion The production of anti-E. coli antibodies by ELISA and the selection of E. coli strains