細胞接着因子CARが婦人科悪性腫瘍の浸潤・転移能に及ぼす影響について

(1)ヒト末梢血リンパ球よりメッセンジャーRNAを抽出しcDNAライブラリーを作成した。CAR(cell adhesion regulator)遺伝子の5'端と3'端にそれぞれプライマーとして合成オリゴヌクレオチドを作成し、上述のcDNAをテンプレートとしてPCR(polymerase chain reaction)を施行した。増幅されたDNA分子を蛋白発現ベクターにクローニングし、大腸菌に移入し、CAR蛋白を発現させることに成功した。得られた発現蛋白をラットに免疫することにより抗CAR抗体を得た。これを用いて子宮頚癌、子宮体癌、卵巣癌などの手術標本の免疫組織染色を施行し、CAR蛋白の発現と局所について検討したいと考えている。(2)子宮体癌細胞株10種より上記と同様にしてcDNAを作成し、PCRを施行したところいずれの細胞株でもCAR遺伝子が発現されているのが確認された。さらにこの遺伝子の塩基配列を決定したところ、報告されているものと完全に一致していた。今後、婦人科癌手術標本におけるCAR遺伝子のRNA発現レベル、DNA遺伝子異変などについて検討する予定である。(3)クローニングしたCAR遺伝子をプローブとして用いることにより、婦人科癌の手術標本でのCAR遺伝子の発現を、in situ hybridization法で検出し、(1)や(2)の結果と比較したいと考えている。

(1)ヒト末梢血リンパ球よりメッセンジャーRNAを抽出しcDNAライブラリーを作成した。CAR(cell adhesion regulator)遺伝子の5'端と3'端にそれぞれプライマーとして合成オリゴヌクレオチドを作成し、上述のcDNAをテンプレートとしてPCR(polymerase chain reaction)を施行した。増幅されたDNA分子を蛋白発現ベクターにクローニングし、大腸菌に移入し、CAR蛋白を発現させることに成功した。得られた発現蛋白をラットに免疫することにより抗CAR抗体を得た。これを用いて子宮頚癌、子宮体癌、卵巣癌などの手術標本の免疫組織染色を施行し、CAR蛋白の発現と局所について検討したいと考えている。(2)子宮体癌細胞株10種より上記と同様にしてcDNAを作成し、PCRを施行したところいずれの細胞株でもCAR遺伝子が発現されているのが確認された。さらにこの遺伝子の塩基配列を決定したところ、報告されているものと完全に一致していた。今後、婦人科癌手術標本におけるCAR遺伝子のRNA発現レベル、DNA遺伝子異変などについて検討する予定である。(3)クローニングしたCAR遺伝子をプローブとして用いることにより、婦人科癌の手術標本でのCAR遺伝子の発現を、in situ hybridization法で検出し、(1)や(2)の結果と比較したいと考えている。