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細胞接着因子CARが婦人科悪性腫瘍の浸潤・転移能に及ぼす影響について

细胞粘附因子CAR对妇科恶性肿瘤侵袭转移能力的影响

基本信息

批准号：
05771227
负责人：
井出佳宏
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771227/
关键词：
接着分子 CAR CMAR 婦人科癌浸潤転移

项目摘要

(1)ヒト末梢血リンパ球よりメッセンジャーRNAを抽出しcDNAライブラリーを作成した。CAR(cell adhesion regulator)遺伝子の5'端と3'端にそれぞれプライマーとして合成オリゴヌクレオチドを作成し、上述のcDNAをテンプレートとしてPCR(polymerase chain reaction)を施行した。増幅されたDNA分子を蛋白発現ベクターにクローニングし、大腸菌に移入し、CAR蛋白を発現させることに成功した。得られた発現蛋白をラットに免疫することにより抗CAR抗体を得た。これを用いて子宮頚癌、子宮体癌、卵巣癌などの手術標本の免疫組織染色を施行し、CAR蛋白の発現と局所について検討したいと考えている。(2)子宮体癌細胞株10種より上記と同様にしてcDNAを作成し、PCRを施行したところいずれの細胞株でもCAR遺伝子が発現されているのが確認された。さらにこの遺伝子の塩基配列を決定したところ、報告されているものと完全に一致していた。今後、婦人科癌手術標本におけるCAR遺伝子のRNA発現レベル、DNA遺伝子異変などについて検討する予定である。(3)クローニングしたCAR遺伝子をプローブとして用いることにより、婦人科癌の手術標本でのCAR遺伝子の発現を、in situ hybridization法で検出し、(1)や(2)の結果と比較したいと考えている。

(1) ヒトPeripheral blood リンパよりメッセンジャーRNAを extracted and しcDNA ライブラリーを was made. CAR(cell adhesion regulator) The remaining 5' terminal and the 3' terminal にそれぞれプライマーとして synthesized オリゴヌThe above-mentioned cDNA をテンプレートとしてPCR (polymerase chain reaction) is implemented. The DNA molecules were enlarged and the protein was removed, and the coliform bacteria were transferred into it, and the CAR protein was successfully transferred. Get the protein をラットにimmune することによりanti-CAR antibody をgetた. We performed immunohistostaining on surgical specimens of uterine cancer, uterine corpus cancer, and ovarian cancer, and performed CAR protein research at the laboratory. (2) 10 types of uterine cancer cell lines were prepared and PCR was performed using the same method described above.行したところいずれの Cell line でもCAR 缝子が発appears されているのがconfirmationされた. The report is completely consistent and consistent. From now on, it will be determined whether the CAR remains of the gynecological cancer surgery specimens will be detected by the RNA, and the DNA will be different from the original specimen. (3)クローニングしたCAR缝子をプローブとして用いることにより、Gynecological cancer surgical specimensでのCAR缝子の発appearを、in situ The results of the hybridization method are compared, and the results of (1) and (2) are compared.