住民検診の血餅を利用したDNAバンクの作製

従来遺伝子DNAの抽出にあたっては抗擬固剤 を入れ、新たに採血するのが一般的であった。また抽出方法についても、面倒な白血球の分離やフェノールといった 危険な薬剤を使用するのが通常の方法である。今回私は地域住民の遺伝子解析のため、普段は廃棄されている住民検診の血清除去の血餅を利用したDNAの容易な抽出方法を開発した。住民検診の血餅200mulをProteinase K を含むLysis solution で処理後、飽和食塩水とクロロホルムで混和後、上澄を90%エタノールで沈殿させDNAを回収した。エタノール沈殿の際に純エタノールを使用せず、90%エタノールを使用することにより、PCR増幅の阻害となりうる過剰な塩分、赤血球色素の除去が効率よく行われることが判明した。このDNAはかなり純粋なもので、100回以上のPCR(Polymerase chain extension)が可能で、なおかつ長期の冷蔵庫保存にも耐える。100回以上のPCRが可能ということはある遺伝子疾患についてその遺伝子坐位を特定可能であることを意味する。また方法が診療所の検査室レベルでも可能であり、危険、高価な試薬を使う必要がない。また住民検診の血餅を用いることにより検体が収集しやくすく、遺伝的集積の強いと考えられる地域の遺伝子解析を容易ならしめるものと考えられ、現在J Clin Patholに投稿中デアル。なお現在地域住民の病態、住民検診のデータのと関連について、angiotensin converting ernzyme,CYPA1A,apoproteinの遺伝子や、polymorphism を示す、遺伝子markerについてPCRで可能なものについて解析中である。

従来遺伝子DNAの抽出にあたっては抗擬固剤 を入れ、新たに採血するのが一般的であった。また抽出方法についても、面倒な白血球の分離やフェノールといった 危険な薬剤を使用するのが通常の方法である。今回私は地域住民の遺伝子解析のため、普段は廃棄されている住民検診の血清除去の血餅を利用したDNAの容易な抽出方法を開発した。住民検診の血餅200mulをProteinase K を含むLysis solution で処理後、飽和食塩水とクロロホルムで混和後、上澄を90%エタノールで沈殿させDNAを回収した。エタノール沈殿の際に純エタノールを使用せず、90%エタノールを使用することにより、PCR増幅の阻害となりうる過剰な塩分、赤血球色素の除去が効率よく行われることが判明した。このDNAはかなり純粋なもので、100回以上のPCR(Polymerase chain extension)が可能で、なおかつ長期の冷蔵庫保存にも耐える。100回以上のPCRが可能ということはある遺伝子疾患についてその遺伝子坐位を特定可能であることを意味する。また方法が診療所の検査室レベルでも可能であり、危険、高価な試薬を使う必要がない。また住民検診の血餅を用いることにより検体が収集しやくすく、遺伝的集積の強いと考えられる地域の遺伝子解析を容易ならしめるものと考えられ、現在J Clin Patholに投稿中デアル。なお現在地域住民の病態、住民検診のデータのと関連について、angiotensin converting ernzyme,CYPA1A,apoproteinの遺伝子や、polymorphism を示す、遺伝子markerについてPCRで可能なものについて解析中である。