骨内非コラーゲン蛋白を指標にした骨粗鬆症の新しい血清診断法の開発

以骨内非胶原蛋白为指标开发骨质疏松症血清诊断新方法

• 批准号: 06771150
• 负责人: 松山 敏勝
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771150/
• 关键词: 骨粗鬆症; 骨内非コラーゲン蛋白; 血清診断法; ELISA法

本研究の目的は、骨内非コラーゲン蛋白の中で、骨組織に特異的な蛋白であるBone Sialoprotein(以下BSP)を精製し、そのモノクロナール抗体を作製する。そして、BSPの血清診断としての定量法を確立することにある。この目的のために、まず牛脱灰骨よりFisherらの方法に準じて精製を行い、最終的には逆相クロマトグラフィーで単一バンドを呈する分画を得た。SDS-PAGEでの検定でも、分子量70Kに相当する単一バンドを呈していた。この分画を用いてKohler and Milsteinの方法でモノクローナル抗体を作製した。その結果、56、57、72の3種類の抗体を得た。この3種類の抗体はWestern Immuno-blotting法ではいずれも70K相当の精製BSPと高い特異性を有していた。得られた抗体56を用いた免疫組織化学的手法では、骨細胞、骨芽細胞の細胞質とともに類骨基質にその局在を認めた。次いで、ELISA-Captured assay法で、精製BSPを標準試料として3.0ng/mlより1.0μg/mlの間で安定した定量曲線が得られた。ヒト血清を用いた測定再現率は、日内変動が平均17.1%、日差変動が15.7%とほぼ満足できる測定精度を示した。50才以上の女性で単純X線で椎体骨折(+)群53名と骨折(-)群52名の2群間で血清BSP値を比較したところ、骨折(+)群は平均15.5ng/mlで骨折(-)群は12.1%と骨折(+)群が骨折(-)群に比べて有意に高値を示し、血清BSP値が新しい骨粗鬆症の診断マーカーとして有用と考えられた。

The purpose of this study was to purify and prepare antibodies against Bone Sialoprotein(hereinafter referred to as BSP), a non-protein in bone and a protein specific to bone tissue. The quantitative method for diagnosis of BSP The purpose of this paper is to improve the quality of the products and to improve the quality of the products. SDS-PAGE was used to determine the molecular weight of the protein. The method of Kohler and Milstein was used to prepare the antibody. The results showed that 56, 57 and 72 antibodies were obtained. These three types of antibodies are highly specific and highly purified at 70K by Western Immuno-blotting The results of immunohistochemical staining showed that the cytoplasm of osteocytes and osteoblasts was not changed. The ELISA-Captured assay method was used to determine the stability of BSP standard sample at 3.0ng/ml and 1.0μg/ml. The average reproduction rate of serum was 17.1% in daily variation, 15.7% in daily variation, and 15.7% in daily variation. In women aged 50 or older, the serum BSP values were significantly higher in the fracture (+) group than in the fracture (-) group (n = 53) and in the fracture (-) group than in the fracture (+) group (n = 52).

项目成果

Kasashi,K. Matsuyama,T.et al.: "Bone sialoprotein:Establishment of an assay system and assessment of serum level in normal and osteoporptic patients." J.B.M.R.9. S332- (1994)

卡萨西，K.

山村俊昭、松山俊勝 他: "Bone Sialoproteinに関する研究(第3報)-定量測定法の開発と臨床応用について-" 日整会誌. 68. S1340- (1994)

Toshiaki Yamamura、Toshikatsu Matsuyama 等：“骨唾液酸蛋白的研究（第 3 次报告）- 定量测量方法的开发和临床应用 -”日精学会杂志 68. S1340-（1994）。

松山敏勝 他: "Bone Sialoprotein II(BSP II)の精製、単クローン抗体の作製、組織局在の解析および定量測定法の開発" 日骨代謝. 12. 260- (1994)

Toshikatsu Matsuyama 等：“骨唾液蛋白 II (BSP II) 的纯化、单克隆抗体的生产、组织定位的分析以及定量测量方法的开发”Nippon Bone Metabolism 12. 260- (1994)。

Matsuyama,T.et al.: "Bone sialoprotein:Isotation and immunohistochemical localization in human ossifying front and pathological condition. A comparison between osteocalcin and osteonectin." J.B.M.R.9. S183- (1994)

Matsuyama,T.et al.：“骨唾液蛋白：人类骨化前沿和病理状况中的分离和免疫组织化学定位。骨钙素和骨连接蛋白之间的比较。”