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脈絡膜新生血管発生による細胞成長因子の分子生物学的研究

脉络膜新生血管诱导细胞生长因子的分子生物学研究

基本信息

批准号：
06771557
负责人：
緒方奈保子
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

実験的脈絡膜新生血管発生、成長、退縮の過程におけるbasic fibroblast growth factor(b-FGF)の関与をin situ hybridyzationの手法を用い、形態学的変化を知ると同時に、RNAプローブで、そのm-RNAの発現の推移と関連を検討した。実験動物として成熟有色ラット(Brown-Norway系)を用い、眼底後極部にクリプトンレーザーで、強度光凝固を行い、実験的脈絡膜新生血管を作成した。光凝固後、2時間、2日、7日、2週間、4週間に眼底撮影、蛍光眼底造影を行い、新生血管発生、成長の過程を観察し、4%パラフォルムアルデヒドにて灌流固定を行なったのち、眼球摘出し、5μmの凍結薄切切片を作成した。Basic-FGFのcDNAをBluescriptにサブクローニングし、T3、T7 RNAポリメラーゼでcRNAを増幅すると同時にDigoxigenin(DIG)による標識を行ない、anti-sense、senseリボプローブを作成した。組織切片上で標識したリボプローブによるハイブリダイゼーションを行ない、ブローブ結合部を発色させ、b-FGFの発現を観察した。光凝固直後では、凝固部にb-FGF mRANの発現を認めなかったが、3日後、脈絡膜新生血管発生期では、光凝固部の増殖した細胞に著しい発現をみた。1週後、2週後の新生血管の発育成長期では、新生血管の内皮細胞、増殖した網膜色素上皮細胞、線維芽細胞にb-FGFの発現をみた。4週後、脈絡膜新生血管の退縮期には、これらの細胞に発現はみられなかった。このように、脈絡膜新生血管発生からの成長の過程において、b-FGFが関与していることが示された。

The relationship between the basic fibroblast growth factor(b-FGF) and the method of in situ hybridyzation, morphological changes, and the development of m-RNA in choroidal neovascularization were discussed. In animals, mature color (Brown-Norway system) is used, posterior fundus is used, intensity photocoagulation is used, and choroidal neovascularization is produced. After photocoagulation, 2 hours, 2 days, 7 days, 2 weeks, 4 weeks, fundus photography, observation of neovascularization, perfusion fixation, eyeball extraction, 5μm frozen thin section were performed. Basic-FGF cDNA Bluescript, T3, T7 RNA, cRNA, Digoxigenin(DIG), anti-sense, sense-free cDNA Tissue sections were prepared to detect the presence of b-FGF and the presence of B-FGF. 3 days after photocoagulation, the development of choroidal neovascularization and the development of photocoagulation cells were observed. After 1 week and 2 weeks, the development of endothelial cells, retinal pigment epithelial cells and vascular buds in neovascularization was observed. After 4 weeks, the choroidal neovascularization in the retraction phase, the cell development, and the development of choroidal neovascularization. The development of choroidal neovascularization and b-FGF are related to the development of choroidal neovascularization.