P.gingivalisの産生する溶血毒素の精製と生物活性に関する研究

本研究では、381株の産生する溶血素を精製してその性状を調べ、さらに電子顕微鏡によって赤血球の膜に及ぼす変化を観察した。381株の溶血素は、血液を含まない培地で培養したときは、その上清、細胞内、膜成分のいずれからも検出されず、血液寒天平板培地による培養ではじめて産生され、培養懸濁上清成分中に多量に存在した。そこでその懸濁上清成分を粗標品として、硫安塩析、DEAE Sepharoseによるイオン交換クロマトグラフィー、Sephacryl S-300によるゲル濾過によって精製を行ったところ、溶血素価が9.1倍に濃縮された部分精製標品が得られた。部分精製標品の溶血活性は、SH保護剤により促進され、ヨードアセトアミド、ヨード酢酸、EDTA、アルギニン、コレステロールにより阻害された。また金属イオンの影響を受け、CaイオンとZnイオンによって抑制された。溶血活性の至適pHおよび至適温度は、それぞれpH7.5〜8.0および35〜40℃であった。この部分精製した溶血素は非常に不安定で、4℃において96時間静置すると活性の半分以上が失われ、粗標品と比較して著しく安定性が低下した。培養上清の溶血素と反応させたヒツジ赤血球を電子顕微鏡で観察すると、正常赤血球と比較して多様な形態を呈し、赤血球細胞膜が部分的に破壊されている像が認められた。

本研究では、381株の産生する溶血素を精製してその性状を調べ、さらに電子顕微鏡によって赤血球の膜に及ぼす変化を観察した。381株の溶血素は、血液を含まない培地で培養したときは、その上清、細胞内、膜成分のいずれからも検出されず、血液寒天平板培地による培養ではじめて産生され、培養懸濁上清成分中に多量に存在した。そこでその懸濁上清成分を粗標品として、硫安塩析、DEAE Sepharoseによるイオン交換クロマトグラフィー、Sephacryl S-300によるゲル濾過によって精製を行ったところ、溶血素価が9.1倍に濃縮された部分精製標品が得られた。部分精製標品の溶血活性は、SH保護剤により促進され、ヨードアセトアミド、ヨード酢酸、EDTA、アルギニン、コレステロールにより阻害された。また金属イオンの影響を受け、CaイオンとZnイオンによって抑制された。溶血活性の至適pHおよび至適温度は、それぞれpH7.5〜8.0および35〜40℃であった。この部分精製した溶血素は非常に不安定で、4℃において96時間静置すると活性の半分以上が失われ、粗標品と比較して著しく安定性が低下した。培養上清の溶血素と反応させたヒツジ赤血球を電子顕微鏡で観察すると、正常赤血球と比較して多様な形態を呈し、赤血球細胞膜が部分的に破壊されている像が認められた。