Prevotella loescheiiのプラスミン様プロテアーゼの精製と諸性質

洛氏普雷沃菌纤溶酶样蛋白酶的纯化及其性质

• 批准号: 06771753
• 负责人: 是枝 雄二
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771753/
• 关键词: Prevotella loescheii; プラスミン様酵素; カリクレン; コラゲナーゼ; キニン産生カスケード

本研究では、歯周病関連菌とされるPrevotella loescheii ATCC15930の細胞抽出液中からプラスミン様酵素の部分精製を行い、諸性質を検索した。酵素活性の測定はBoc-Val-Leu-Lys-MCA合成蛍光基質を用いるNagaseとBarrettの方法に従って行い、酵素精製に際しては、Q Sepharoseカラム、リシン-Sepharoseアフィニティカラム、ゲル濾過カラムを用いた一連のカラムクロマトグラフィによって行った。本酵素活性の至適pHは8.0であり、合成基質Boc-Val-Leu-Lys-MCAに対するKm値は、0.1mMであった。酵素活性に与える阻害剤の影響を調べたところDiPF(diisoprophyl flurohosphate)、APMSFにより酵素活性が阻害されたことからセリン酵素であることが考えられる。生理的役割を調べるために、本精製酵素をヒト血清成分から精製したプレカリクレインに作用させ、あらかじめ色素を静脈注射したモルモットの皮下に精製プラスミン様酵素を注射し、色素の透過性への影響を調べた結果、血管透過性の亢進が認められた。このことは、Prevotella loescheiiのプラスミン様酵素がプレカリクレインを活性型カリクレンに変換したものと考えられる。また、本酵素をヒト歯根膜細胞の不活性型コラゲナーゼに作用させたところ活性型コラゲナーゼへの変換が認められた。以上のことから、細菌産生プロテアーゼが外因子として宿主側の内因性キニン産生カスケードに働きかけて、局所の血管透過性を亢進するとともに、コラゲナーゼの活性化にも関与するものと考えられ、そのことが局所の歯周組織や根尖組織の炎症の発症進展、破壊に関与することが示唆された。

This study focused on the partial purification of enzymes from cell extracts of Prevotella loescheii ATCC15930, a bacterium associated with perinatal syndrome, and its properties. Determination of enzyme activity using Boc-Val-Leu-Lys-MCA synthetic matrices using Nagase Barrett method, enzyme purification method, Q Sepharoseカラム、リシン-Sepharoseアフィニティカラム, ゲル filter カラムを use いた一连のカラムクロマトグラフィによって行った. The optimal activity of this enzyme is pH 8.0, synthetic matrix Boc-Val-Leu-Lys-MCA, pH 0.1mM, and pH 0.1mM. Enzyme activity is affected by the inhibitory factor DiPF (diisoprophyl) flurohosphate), APMSF enzyme activity is blocked and enzyme activity is blocked. Physiological cutting を tune べ る た めに, this refined enzyme を ヒ ト serum component か ら し た プ レ カ リ ク レ イ ン に action さ せ, あ ら か じ め pigment を intravenous injection Injection of subcutaneous purified enzyme, pigment permeability adjustment, and vascular permeability enhancement.このことは、Prevotella loescheii のプラスミン様 enzyme がプレカリクレインを active type カリクレンに変change したものと卡えられる.また、This enzyme is made from the inactive type of root membrane cells. Use させたところactivated コラゲナーゼへの変 for がcognizant められた. The above factors are the external factors and the internal factors on the host side that are produced by bacteria. Nuno produces カスケードに働きかけて, local vascular permeability hypersensitivity するとともに. The inflammation of the periradicular tissue and the periapical tissue causes the progression of the disease and the symptoms of inflammation and inflammation.