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培養カルシトニン細胞の神経様形態変化におけるタウタンパク質の役割

tau蛋白在培养降钙素细胞神经元样形态变化中的作用

基本信息

批准号：
06780620
负责人：
西山一朗
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Komazawa Women's University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.C細胞の神経様形態変化に関わるプロテインキナーゼの種類ラット胎仔甲状腺より作成したC細胞の初代培養系では、カルフォスチンCによって神経様形態変化が誘起されたが、H-89やKN-62は無効であった。このことより、神経様形態変化にはプロテインキナーゼCが関与していることが示唆された。一方rMTC6-23細胞では、カルフォスチンCおよびH-89で神経様形態変化が認められ、KN-62では認められなかった。この結果より、プロテインキナーゼCおよびサイクリックヌクレオチド依存性プロテインキナーゼの関与が示唆された。2.C細胞の神経様形態変化とタウのリン酸化状態との関連イムノブロット法によってrMTC6-23細胞のタウのアイソフォームを確認したところ、分子量60,000〜80,000の低分子量タウならびに分子量110,000〜120,000の高分子量タウの両方が存在しており、両者はさまざまな程度にリン酸化を受けていることが示された。プロテインキナーゼ阻害剤あるいはプロテインホスファターゼ阻害剤の存在下で培養したrMTC6-23細胞につき、同様にタウの分子型を調査した結果、前者によりタウの脱リン酸化、後者によりリン酸化が起こる傾向が認められたが、結論を得るには至らなかった。明確な結果が得られなかった原因として、rMTC6-23細胞がヘテロな細胞集団であり、これらの薬剤に対する反応性にも個々の細胞間での差異があることが疑われた。そこで下記3の実験を行った。3.rMTC6-23細胞のサブクローニング上記2の問題点を解決するため、rMTC6-23細胞のサブクローニングを行い、プロテインキナーゼ阻害剤により神経様形態変化を起こす均質な細胞亜株の確立を試みた。その結果、ほぼ条件を満たす細胞集団を得ることに成功した。今後この細胞亜株を用い、神経様形態変化とタウのリン酸化状態との相関について再検討を行なう予定である。

1. C cell's neuromorphic changes were induced by H-89 and KN-62 in the primary culture system of C cells. This is the first time I've ever seen a woman. One side of rMTC6-23 cell line is called "H-89" cell line, and the other side is called "KN-62" cell line. The results of this study are as follows: 1. 2. The morphological changes of C cells and the relationship between their acidification state and their metabolic state were confirmed by the method of molecular weight analysis. The molecular weight of C cells was 60,000 ~ 80,000. The molecular weight of C cells was 110,000 ~ 120,000. This is the first time I've ever seen a woman. In the presence of the inhibitor, rMTC6-23 cells were cultured and their molecular types were investigated. The results showed that the former had a tendency to deacidify, while the latter had a tendency to deacidify. The conclusion was that the former had a tendency to deacidify. To clarify the reasons for the results, rMTC6-23 cells were found to be different from each other in cell populations. The following is a summary of the results. 3. To solve the problem of rMTC6 -23 cell culture, rMTC6 -23 cell culture was carried out, and the inhibition agent was selected. The morphological change of rMTC6 -23 cell culture was initiated and the establishment of homogeneous cell strain was tried. The results of the study are as follows: In the future, the cell strain will be used, the morphological change of the brain and the acidification state of the brain will be discussed.