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超強毒マレック病ウイルス特異性ゲノム小断片のクローニングと感染鶏内分布の解析

克隆高毒力马立克氏病病毒特有的小基因组片段并分析其在受感染鸡内的分布

基本信息

批准号：
06760273
负责人：
遠藤大二
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ニワトリヘルペスウイルス1型〔マレック病ウイルス〕は、主として鶏に悪性のリンパ腫を誘発する病原性株からなるが、非病原性の株も含まれる。特に非病原性のCVI-988株は生ワクチンとして広く利用されている。このワクチンの特徴はマレック病ウイルスの感染を防止せず、その発病のみを防ぐ事にある。現在では、ワクチン株と病原性株の区別を個々の感染細胞について行なうことは不可能である。この検出上の不可分性は、詳細な機序についての研究を進める上で妨げとなっている。そこで、申請者は、病原性マレック病ウイルスに特異的なゲノム断片のクローニングを目的とした研究を立案した。本研究では、病原性株としてMd5、ワクチン株としてCVI-988を選び、マレック病ウイルスゲノムDNAの精製をおこなった。ウイルス粒子の単離を介した精製法では収率が不安定なため、パルスフィールド電気泳動法により、総量500ngウイルスゲノムDNAを直接に精製した。このDNAをMspIで切断後、断片増幅用リンカーと接続した。続けてこのリンカーをプライマーとするPCR反応によりDNA断片を非特異的に増幅し、40μgのウイルスゲノムアンプリコンを得た。このゲノムアンプリコンはウイルスゲノムDNAの全長と均等にハイブリダイズし、ウイルスゲノム全長に対応するプローブとして利用可能である事が示された。100ngのアンプリコンにリンカーを接続した後、リンカーを除去したCVI-988ゲノムアンプリコンとハイブリダイズ後、Md5ゲノムアンプリコンに接続したリンカーをプライマーとして増幅した。このアンプリコンについてのサウザンブロット解析により、第二の増幅反応で生成されたアンプリコンはMd5ゲノムに特異的な断片を含む事が示唆された。本研究により、Md5ゲノム特異的DNA断片をクローニングする事が可能となった。

Pathogenic strains, non-pathogenic strains, and non-pathogenic strains that are induced by the virus are included in the virus. In particular, the non-pathogenic CVI-988 strain is resistant to infection. The characteristics of this disease are: prevention of infection, prevention of disease, prevention of disease Now it is impossible to distinguish between pathogenic strains and infected cells. The inseparability of this kind of research is discussed in detail. Therefore, the applicant has filed a case for the purpose of conducting research on the cloning of specific nakonomu fragments in pathogenic maireka disease. In this study, pathogenic strains Md5 and CVI-988 were selected and purified. The purification method of the particles is unstable, and the total amount of the particles is 500ng. After the DNA is cut, the fragment is amplified. The DNA fragment was amplified by PCR and then amplified by 40μg PCR. This is the first time that the DNA has been used for the full length of the DNA. 100ng The second phase of the amplification process is to generate the first phase of the amplification process. The second phase of the amplification process is to generate the second phase of the amplification process. In this study, Md5-specific DNA fragments were identified.