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HIVのnef遺伝子産物と結合するT細胞蛋白質の発見とNef蛋白の作用機序の解析

发现与HIV nef基因产物结合的T细胞蛋白并分析Nef蛋白的作用机制

基本信息

批准号：
06770112
负责人：
井上雅弘
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770112/
关键词：
トリプターゼTL_2 HIV-1 Nef T cell BIAcore

项目摘要

我々は,これまでの研究で,Nef蛋白(Nefと略す)特異的に結合するT cell内の蛋白の一種が,トリプターゼTL_2(TL_2と略す)で,あることを発見している。今年度の研究では,NL43,およびHXB 3 HIV-1 Plasmid由来のNefを大腸菌にGST融合蛋白として発現させ,さらにNL43Nefについては,3つのペプチドに分けGST融合蛋白として発現させ,各々を,精製し実験に用いた。TL_2はT cellより分離精製したものを用いた。また,それらの結合状態を,リアルタイムで解析することができるBIAcoreを使用し以下の結果を得た。1)NL43Nefは,解離定数9.2×10^<-6>MでTL_2と結合する。また,HXB3Nefも同様な解離定数で結合する。この結果は,TL_2との結合が,strainの異なったHIVのNefでも同様に起こることを示す。2)NL43NefとTL_2の結合は,N末端から数えてHIV-1NL43のneucleotide numberでいえば8789-9140にコードされる領域で起っている。3)この結合により,TL_2の蛋白分解酵素としての活性は影響をうけなかった。1)の考察:この結合の解離定数は,Rat CD2とCD48の結合,および,小胞体結合性蛋白とアクセプター蛋白であるsyntaxinとの結合などと同程度であり,この結合は,強くはないが,Nefの細胞内局在がTL_2のそれと極めて近いことを加味すると,生体内で十分意味のあるものであると結論される。2)の考察:当初,エイズウイルスの膜蛋白であるgp120がTL_2のGPGRの配列に結合していることより,NefのGPGVRを含む配列がTL_2との結合に関与していると予測していたが,このGPGVRは結合には関係ないけれども,GPGRの4番目のアミノ酸RがTL_2との結合には重要であることが明らかとなった。現在,結合部位の詳細を解明しつつある。また結合のbiologicalな意味はまだ不明であるが,NL43NefとTL_2の結合部位を明らかにし,その結合部位にミューテーションを入れて作成したNefをT細胞に発現させることにより,originalなNL43Nefを発現させたものと比較する手法で,明らかにする予定である。3)の考察:TL_2の働きについて蛋白分解酵素以外の活性の有無を検討中である。

In this study,Nef protein (Nef) specifically binds to TL_2(TL_2), a protein in T cells. This year's research shows that NL43, NEF and HXB3 HIV-1 Plasmid are derived from E. coli and GST fusion protein is developed, NL43 NEF is developed, and GST fusion protein is developed, purified and used. TL_2 cell separation The following results were obtained from the analysis of the combined state of BIAcore: 1)NL43Nef, dissociation constant 9.2×10^<-6>M TL_2. HXB3Nef is the same as HXB 3 Nef. The results show that TL_2 and HIV can be combined in different ways. 2) NL43 Nef to TL_2 binding, N-terminal nucleotide number to HIV-1 NL43 nucleotide number to 8789-9140. 3) The binding activity of TL_2 proteolytic enzyme is affected by the binding activity. 1) Investigation: The dissociation of the binding of Rat CD2 and CD48 is determined by the binding of small cell binding protein and protein syntaxin to the same extent. 2) In the beginning, the membrane protein of GPGR was found to be gp120, TL2 and GPGR binding, and GPGVR binding was found to be important in GPGR binding. Now, combine the details of the parts to explain clearly. The biological meaning of NL43 Nef and TL_2 binding sites is unclear, and the binding sites of NL43 Nef and TL_2 binding sites are determined. 3) Investigation:TL_2 activity was investigated in the presence or absence of activity other than proteolytic enzyme.