ABO式血液型遺伝子の組織特異的スプライシングの解明

阐明 ABO 血型基因的组织特异性剪接

• 批准号: 06770315
• 负责人: 小湊 慶彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770315/

ABO式血液型遺伝子の解析をおこなった、ワシントン大学Biomembrane研究所の山本文一郎博士から供与されたABO式血液型遺伝子の上流域の入ったプラスミドHG-1から様々な長さの上流域を切り出し、それらをルシフェラーゼ遺伝子の前に挿入し、レポータープラスミドの作製をした。使用したベクターはピッカジーン、ベーシックベクターである。次に血液型抗原が発現している細胞株MKN45にレポータープラスミドをエレクトロポレーション法を用いて遺伝子導入した。同時にRas sarcoma virusのプロモータを上流域に挿入したガラクトシダーゼ遺伝子の入ったプラスミドも導入した。3日間培養後、細胞融解液を加え、細胞抽出液を得た。次にルシフェラーゼアッセイ用基質を加え、発光量を測定した。またガラクトシダーゼの活性を測定した。この値は遺伝子導入効率となり、ルシフェラーゼの発光量/ガラクトシダーゼ活性の比を計算した。この値により上流域のプロモーター活性が推定され、ABO式血液型遺伝子の転写制御に関与する領域を同定した。β1,4-Galactosyltransferaseのプロモーターと同様に普遍的因子であるSplが結合する翻訳開始点の上流152塩基が重要であることが示された。そこにはその塩基配列から6個所のSpl結合部位が推定される。

The analysis of ABO blood type gene was carried out by Dr. Ichiro Yamamoto of Biomembrane Research Institute of the University of Japan, and the production of ABO blood type gene was carried out in the upstream region of HG-1. Use ー ーン, ー ー. The second type of blood antigen was found in MKN45 cell line. At the same time, Ras sarcoma virus is introduced into the upper basin. 3. After day culture, add cell melt solution and extract solution. The next step is to measure the amount of light emitted by the substrate. The activity of the enzyme was measured. This value is calculated by the ratio of the amount of light emitted and the amount of light emitted. The activity of ABO blood type gene was estimated and the control of ABO blood type gene was determined.β 1,4-Galactosyltransferase is the most common factor in the synthesis of β 1,4-Galactosyltransferase. The six binding sites of Spl were estimated.

项目成果

Yshihiko Kminato,et al.: "Monocyte Expression of the Human Prointerleukin 1βGene (ILlB)Is Dependent on Promoter Sequences Which Bind the Hematopoietic Transcription Factor Spi-1/PU.1" MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY. 15. 58-68 (1995)

Yshihiko Kminato 等人：“人白介素原 1β 基因 (IL1B) 的单核细胞表达依赖于结合造血转录因子 Spi-1/PU.1 的启动子序列”《分子和细胞生物学》15. 58-68 (1995)。