精子発生を制御する精巣内傍分泌因子の単クローン抗体による探索とその機能の解析

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我々は、精巣の発達段階に特異的に分泌される物質に対する抗体を得るために、精祖細胞の分裂開始時期と減数分裂開始時期に当たる未成熟ラット精巣の成分を免疫して数種類の単クローン抗体を作製し、その中の単クローン抗体MC301が認識する抗原について重点的に研究を進めてきたので、以下にその結果の概要を示す。(1)抗体MC301をプロテインGセファロースに架橋して抗体アフィニティーカラムを作製し、これを用いて成熟ラット精巣の細胞外成分よりMC301抗原を分離した。分離した成分中には、分子量91,000、65,000、50,000、48,000ダルトンのペプチドが含まれ、この中の91,000ダルトンのペプチドのみがMC301に対するエピトープを有していた。(2)生後9日齢の未成熟ラット精巣の精細管を、蛋白質加水分解酵素等の酵素処理によって細胞を分散し、ミリポアフィルター上で培養し、これをパラフィンに包埋して光顕で観察すると、培養の経過とともに精細管様の構造が再構築されてくる。(3)培地にアフィニティー精製したMC301抗原を添加すると、基底膜の形成、セルトリ細胞の形態的分化が促進され、MC301抗原は精細管様の構造の再構築に促進的に働くことが示唆された。(4)ABC法により、培養中の細胞のうち、特に筋様細胞に強いMC301陽性反応が観察され、MC301抗原は筋様細胞より産生、分泌され、精細管の構築、維持等に関与していると考えられた。