精子発生を制御する精巣内傍分泌因子の単クローン抗体による探索とその機能の解析

利用单克隆抗体寻找控制精子发育的睾丸旁分泌因子并分析其功能

• 批准号: 06857002
• 负责人: 谷井 一郎
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857002/
• 关键词: 精巣; 傍分泌因子; 単クローン抗体; 筋様細胞; セルトリ細胞; 形態形成; 分化; アフィニティー精製

我々は、精巣の発達段階に特異的に分泌される物質に対する抗体を得るために、精祖細胞の分裂開始時期と減数分裂開始時期に当たる未成熟ラット精巣の成分を免疫して数種類の単クローン抗体を作製し、その中の単クローン抗体MC301が認識する抗原について重点的に研究を進めてきたので、以下にその結果の概要を示す。(1)抗体MC301をプロテインGセファロースに架橋して抗体アフィニティーカラムを作製し、これを用いて成熟ラット精巣の細胞外成分よりMC301抗原を分離した。分離した成分中には、分子量91,000、65,000、50,000、48,000ダルトンのペプチドが含まれ、この中の91,000ダルトンのペプチドのみがMC301に対するエピトープを有していた。(2)生後9日齢の未成熟ラット精巣の精細管を、蛋白質加水分解酵素等の酵素処理によって細胞を分散し、ミリポアフィルター上で培養し、これをパラフィンに包埋して光顕で観察すると、培養の経過とともに精細管様の構造が再構築されてくる。(3)培地にアフィニティー精製したMC301抗原を添加すると、基底膜の形成、セルトリ細胞の形態的分化が促進され、MC301抗原は精細管様の構造の再構築に促進的に働くことが示唆された。(4)ABC法により、培養中の細胞のうち、特に筋様細胞に強いMC301陽性反応が観察され、MC301抗原は筋様細胞より産生、分泌され、精細管の構築、維持等に関与していると考えられた。

We have made progress in the study of antibody production, secretion of substances specific to sperm development stages, initiation of meiosis, immunization of immature sperm components, production of several types of antibodies, and recognition of antigens by single antibody MC301. A summary of the results is presented below. (1)Antibodies MC301 are isolated from the extracellular components of mature sperm by using a bridging antibody system. Among the isolated components, the molecular weight of 91,000, 65,000, 50,000 and 48,000 is 91,000, and the molecular weight of MC301 is 91,000. (2)9 days after birth, the immature sperm cells were dispersed, cultured, embedded, observed, cultured and reconstructed by enzyme treatment such as protein hydrolysis enzyme. (3)This shows that the addition of MC301 antigen refined in culture promotes the formation of basement membranes and the morphological differentiation of cells, and MC301 antigen promotes the reconstruction of the structure of fine tubes. (4)ABC method is related to the production, secretion, fine tube construction and maintenance of MC301 antigen in cultured cells.