ヒト顎骨由来骨芽細胞の細胞増殖におけるPLC-γを介する情報伝達機構の解明

阐明PLC-γ介导的人颌骨成骨细胞增殖的信息传递机制

• 批准号: 07771944
• 负责人: 中西 宏彰
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771944/
• 关键词: 血小板由来成長因子(PDGF); 骨芽細胞; 細胞増殖; PDGFレセプター; チロシンキナーゼ; PLC-γ; チロシン酸化; 情報伝達

血小板由来成長因子(PDGF)は、骨芽細胞の増殖を促進し、この増殖機構にはPDGFレセプターのチロシンリン酸化が関与していることが知られている。線維芽細胞では、PLC-γ、PI-3キナーゼ、GAPおよびc-Raf-1などのタンパク質が、レセプターの持つチロシンキナーゼ活性によりチロシンリン酸化されることが報告されており、これらのタンパク質が増殖シグナルの核への伝達に関与していることが示唆される。本研究ではヒト顎骨由来の骨芽細胞を用い、PDGFによる増殖機構をレセプターおよびPLC-γのチロシリン酸化により検討した。PDGF処理した骨芽細胞の細胞溶解液は抗PDGFレセプター抗体もしくは抗PLC-γ抗体で免疫沈降し、SDS-PAGEにて分離したタンパク質をニトロセルロース膜に転写後、抗ホスホチロシン抗体を用いてウェスタンブロットを行った。その結果PDGF処理によりレセプターのチロシンリン酸化が亢進するのと同様に、PLC-γのチロシンリン酸化も亢進した。この現象はPDGF添加1分後より認められ、10分後が最大で以後徐々に減衰した。またPLC-γとレセプターの両タンパク質は、PDGF処理により共に免疫沈降されことも確認された。PLC-γはPIP^2をIP_3とジアシルグリセロール(DAG)に水解する酵素であるが、IP_3はCa^<2+>の動員を促し、DAGはプロテインキナーゼC (PKC)を活性化し、これらはどちらも細胞を増殖の方向へ導く。またPLC-γはリン酸化されたPDGFレセプターを確認してSH2領域を介してこれに結合するといわれている。本実験より、PDGF刺激で骨芽細胞のPDGFレセプターのチロシンリン酸化が起こるのと同時に、細胞内のPLC-γがレセプターに結合しチロシンリン酸化されるのが確認された。これらのことから、骨芽細胞のPDGFによる増殖機構には、PLC-γを介したPI代謝経路が関与することが示唆された。

Platelet-derived growth factor (PDGF), osteoblast proliferation promotion, and proliferation mechanismはPDGFレセプターのチロシンリン acidification and していることが知られている. Linear bud cell では, PLC-γ, PI-3 キナーゼ, GAP およびc- Raf-1などのタンパク性が、レセプターのholdつチロシンキナーゼlive Sex によりチロシンリン acidification されることが report されており、これらのタンしていることが出款される. In this study, the use of bone bud cells and PDGF-derived proliferative mechanisms of the jawbone Structure of をレセプターおよびPLC-γのチロシリン acidified により検した. PDGF-treated osteoblast cell lysate, anti-PDGF antibody, anti-PLC-γ antibody, immunoprecipitation, SDS-PA After writing the GE Separation System, a quality film, The anti-ホスホチロシン antibody is produced using いてウェスタンブロットを行った.そのRESULTSPDGF-treated によりレセプターのチロシンリンacidificationが康Into the same 様に, PLC-γのチロシンリン acidified もKangjin した. The phenomenon is that after PDGF is added for 1 minute, it will be recognized and the maximum will be reduced after 10 minutes.またPLC-γとレセプターの両タンパクqualityは, PDGF-treated により合にimmunoprecipitation されこともconfirmation された. PLC-γはPIP^2をIP_3とジアシルグリセロール (DAG) hydrolysis enzyme素であるが、IP_3はCa^<2+>のmobilizationをpromoteし、DAGはプロテインキナーゼC (PKC) activates and guides the direction of cell proliferation.またPLC-γはリン acidification されたPDGF レセプターをconfirmed してSH2 domain を中してこれにcombination するといわれている. This 実験より, PDGF stimulates bone bud cells, PDGF レセプターのチロシンリン acidification が出こるのとAt the same time, the intracellular PLC-γ がレセプターに binding しチロシンリン acidification されるのがconfirmation された.これらのことから, Osteoblast のPDGF によるproliferation mechanism には, PLC-γ を mediated PI metabolism 経路 が关 and する こ と が 出款 された.