分裂装置に局在するヒトデ卵70K微小管結合蛋白質の機能解析に関する研究

海星卵70K分裂器微管结合蛋白功能分析研究

• 批准号: 07780632
• 负责人: 細谷 夏美
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Otsuma Women's University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780632/
• 关键词: 細胞分裂; 微小管; 微小管結合蛋白質; 分裂装置; 棘皮動物; 卵細胞

本研究は、我々が棘皮動物の卵細胞より精製した70KMAPにつおて、その機能をさらに詳しく検討することを目標としており、本年度は、(1)70KMAPの微小管結合部及び微小管重合促進活性を持つ部位の同定を行う、(2) 70KMAPのアミノ酸一次配列を明らかにするためにDNAの配列決定を行う、の2点を目標として実験を行った。その結果、現在までのところ以下のような結果を得た。1.キヒトデ卵細胞より精製した70KMAPを、キモトリプシンで限定分解し、得られたフラグメントについて、微小管との共沈実験を行って微小管結合活性を持つ機能フラグメントの同定を試みた。70KMAPは、キンモトリプシンにより、大きく分けて50K〜70K、30K付近、及び15K以下のいくつかのフラグメントに分解される。このうち、明らかに微小管結合活性を示したのは50K〜70Kのフラグメントのみであった。現在、それらのフラグメントのアミノ酸一次配列を自動アミノ酸シークエンサーにより解析中である。2. 1と平行して、70KMAPのアミノ酸一次配列を明らかにするために、まず、PVDF膜上に転写した70KMAPのアミノ酸配列を試みた。しかし、70KMAPのN末はブロックされており、N末端からのアミノ酸配列決定はできなかった。そこで、PVDF膜上でブロムシアン分解を行ったが、うまくいかないため、70KMAPをカラムにより精製し、溶液中でブロムシアン分解を試みている。この方法で得られた70KMAP断片でアミノ酸配列の同定を行い、1より得られた配列も参考にして、ヒトデ卵のcDNAライブラリーをスクリーニングし、クローン得て、70KMAPのDNA配列を決定したいと考えている。また、70KMAPは収量が少ないため、現在、大量に精製する方法についても併せて検討している。

In this study, Echinodermis zoonosis, egg cytosol, 70KMAP enzyme, machine tool, 70KMAP microtubule junction and microtubule coincidence promoting activity were identified in this study, our laboratory, our At 2 o'clock, I want to know what to do. The results are good. Now, the following results are good. 1. The cells of the oocytes were purified by 70KMAP, the microtubules were co-precipitated by the microtubules, the microtubules were co-precipitated, the microtubules were combined with the activity of the microtubules, and the mechanical properties of the cells were determined. 70KMAP, microwave, 50K~70K, 30K, and below 15K. The activity of microtubule binding was shown by the combination of microtubule and microtubule. The activity of microtubule binding showed the activity of microtubule binding. At present, there are some problems in the analysis of the information system in the first time. 2. 1 "parallel", "70KMAP" and "acid" are listed at one time. The device is written on the PVDF film. "70KMAP" is written on the PVDF film. The configuration of acid at the end of 70KMAPN, 70KMAPN, N-terminal and N-terminal is determined by the configuration of acid. In the PVDF film, the solution was broken down, and the solution was broken down. The method was used to determine the same row of 70KMAP fragments, 1 of the reference, the cDNA of eggs, the accuracy of DNA, the determination of DNA and the determination of the same line. There are a large number of methods that can be used to reduce the volume of 70KMAP, and there are a large number of methods.