ヌードマウス移植ヒト肺癌に対するパーティクル銃によるp53癌抑制遺伝子導入

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7年度の研究計画は培養ヒト肺癌細胞に対するパーティクル銃によるp53癌抑制遺伝子導入法の確立であった。(1)ヒト肺癌細胞の採取・培養肺癌肺切除手術にて摘出した20例の肺癌原発巣から癌細胞を採取し血清添加培地(RPMI1640)を用いて細胞培養した。このうち3例の細胞株樹立に成功した。これらの細胞株にプロテイナーゼKを加え蛋白質からDNAを解離、SDSにて蛋白質の変性、フェノール抽出、エタノール沈澱法にてDNAを抽出した。これら3例の抽出したDNAのp53癌抑制遺伝子をPCR法にて増幅し、SSCP法により電気永動することによりp53癌抑制遺伝子の変異の有無をみた。その結果3例中1例にp53癌抑制遺伝子変異が認められた。この細胞株を本実験の対象と選択した。(2)p53癌抑制遺伝子の導入圧力型パーティクル銃(PDS-100/Heシステム;DuPont社製)を用いて正常p53癌抑制遺伝子を、上記の変異型p53癌抑制遺伝子を持つ培養ヒト肺癌細胞に導入させる試みを行った。遺伝子発現ユニットのデザインは[promoter-GUS-正常p53癌抑制遺伝子-poly A]とした。このユニットを金粒子に付着させ圧力型パーティクル銃にて、変異型p53癌抑制遺伝子を持つ培養ヒト肺癌細胞に撃ち込んだ。導入が成功したか否かの判定はレポーター遺伝子として組み込んだβ-グルクロニダーゼ(GUS)遺伝子がX-Gluc色素添加により青色に発色することにより判定している。しかし導入効率が不良でありpromoterの選択に問題があると考えて現在検討中である。