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末梢神経損傷における再生神経・再生軸索の伸長機構の分子生物学的解析

周围神经损伤再生神经和轴突伸长机制的分子生物学分析

基本信息

批准号：
07807142
负责人：
玉井和夫
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至 1996
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究で神経細胞の培養法および培養神経細胞の免疫電顕法を確立することができた。特に培養神経細胞の免疫電顕法は従来存在しなかった新しい手法であり、しかも金コロイド銀増感法を用いることにより目的とする物質の定量化が可能となった。再生神経、特に成長円錐における微量タンパク質の検出およびその動態の検討に今後も必要不可欠な手法といえる。以上の手法を用いて再生神経、再生軸索の伸長機構の解析をおこなっさた。その結果、培養神経細胞の成長円錐におけるPKC各分子種とGAP-43との関連を検討し、PKC各分子種の局在の相違、またGAP-43のリン酸化に関与するのはPKCβまたはδの可能性が高いという新しい知見を得た。そしてPKCとの関連が注目されている神経栄養因子受容体、Trk familyの成長円錐における機能解析も行った。成長円錐にTrk A、Trk B、Trk Cの各神経栄養因子受容体が発現していることを確認し、主に成長円錐の糸状足でその機能を果たしていることが判明した。さらにはシナプス小胞膜蛋白質であるシンタキシンやSNAP-25を分解するボツリヌス毒素を培養神経細胞に作用させると、成長円錐に巨大な小胞が蓄積され神経伸長の阻害、糸状足の退縮が生じることも明かとなり、シナプス小胞膜蛋白質が神経伸長に強く関与していることを示す結果も得た。また成長円錐に発現する接着分子としてインテグリンα6の存在も確認している。以上のように本研究で新しい手法の確立および超微細構造である神経成長円錐における機能タンパク質の解析という成果を得た。

In this study, the culture method of neurons and the immunoelectroporation method of cultured neurons were established. In particular, the immunoelectrochemistry of cultured neurons is a new method for quantification of substances. The regeneration of the brain, the development of the brain, the brain, the development of the brain, the brain, the The above methods are used to analyze the elongation mechanism of the regenerative nerve and regenerative shaft. The results show that the relationship between PKC molecular species and GAP-43 in the growth cone of cultured neurons is discussed, the existence of PKC molecular species is inconsistent, and the relationship between GAP-43 and PKCβ is highly probable. PKC is related to the growth of neurotrophic factor receptors and Trk family. The growth cone Trk A, Trk B and Trk C receptors were identified and the main growth cone functions were identified. In addition, the protein of small cell membrane was decomposed into SNAP-25, and the effect of SNAP-25 on cultured neurons was studied. The results showed that the accumulation of large cells in growth cone inhibited the growth of neurons, and the contraction of human feet was strongly related to the growth of small cell membrane protein. The presence of alpha 6 in the growth cone is confirmed by the presence of the next molecule. In this study, new methods for establishing ultra-fine structures are proposed.