ゾウリムシ(P.caudatum)の接合型物質の研究

草履虫（P.caudatum）交配型物质的研究

• 批准号: 07740663
• 负责人: 堀 学
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07740663/
• 关键词: Paramecium; syngen; mating-type

真核の単細胞生物であるゾウリムシ(P.caudatum)は、その種の中に性的に隔離された遺伝的種(syngen)が存在し、各syngenは一組の相補的な接合型(Even-,Odd-type)で構成される。本研究の目的は、標準株がなくともsyngenを同定できる方法(記載できる同定法)を確立する事であり、当該年度は、syngen3のE-mating type(VI)の接合型物質をコードする遺伝子を単離する為に以下のような研究を行った。I.syngen3のE-typeの強い接合活性を発現している細胞より単離したmRNAとO-typeのlog-とearlystationary-phaseの細胞から単離したmRNAを用いて、Hybrid-subtraction法を行った。そして、7種類のsubtractされたcDNAを得た。II.これらのcDNAをprobeとしてNothern-blotを行い、syngen3の様々なstrainで接合型特異性、或いはculture age特異性を調べた。その結果、今回得られたcDNAは主にlog-phaseでの発現量が多く、接合型特異性よりもstrain特異性の方が高かった。III.今回得られたcDNAの塩基配列を決定し、blastを用いてGenBankのdatabaseと相同性検索を行った。その結果、7種の内3つが、既知のADP-ribosyl transferase,hsp10 homologue,ADHと高い相同性を示し、これまで原生動物で単離されていないDNAであった。本年度に行ったHybrid-subtraction法では、接合型特異的或いは、接合型物質をコードする遺伝子を単離する事ができなかった。しかし、次年度にmRNA differential display法を用いて同様の研究を行う予定である。

真核生物单细胞的生物（caudatum P. caudatum）包含一个性隔离的遗传物种（Syngen），每种物种都由一组互补交叉（均匀，奇数型）组成。这项研究的目的是建立一种方法，即使没有标准菌株（所描述的识别方法），也可以识别Syngen，并且在今年进行了以下研究以隔离编码Syngen3的E-Typs（VI）的共轭物质的基因。使用从表达I. syngen3的强连接活性的细胞中分离出的mRNA和从具有O型对数和早期相相的细胞分离的mRNA的mRNA进行了杂种缩减。然后，获得了七种减去cDNA。 ii。使用这些cDNA作为探针，我们进行了一个nothern模型，并研究了Syngen3菌株的结合特异性或培养年龄特异性。结果，获得此时间的cDNA主要以对数相表达，并且比共轭类型特异性具有更高的应变特异性。 iii。确定获得的cDNA的基本序列，并用爆炸对Genbank的数据库进行同源性搜索。结果，这七个物种中有三个显示出具有已知的ADP-核糖基转移酶HSP10同源物和ADH的高同源性，并且是迄今为止在原生动物中尚未在原生动物中分离出来的DNA。今年进行的杂种辅助方法不允许隔离编码结合特异性或共轭类型物质的基因。但是，第二年将使用mRNA差异显示方法进行类似的研究。