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細菌の生産する糖タンパク質の糖鎖に関する研究

细菌产生的糖蛋白糖链的研究

基本信息

批准号：
07760094
负责人：
上田光宏
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.Aeromonas sp.No.10S-24の生産するキチナーゼの大量調整Aeromonasをキチンを含む培地で大量培養し,菌体を除いた上澄を粗酵素液とし,この液から硫安塩析,陰イオン交換クロマトグラフィー,疎水クロマトグラフィー及びクロマトフォーカシングにより電気泳動的に均一なキチナーゼを単離した.2.Aeromonas sp.No.10S-24由来のキチナーゼ遺伝子のクローニングと大腸菌における発現キチナーゼI遺伝子のクローニングを行ったところ,キチナーゼI遺伝子を含めて,4つのキチナーゼ遺伝子がクラスターを形成するDNA断片の取得に成功した.この断片上にはキチナーゼI遺伝子以外に,III遺伝子もコードされていることが明らかとなった.残りの2つの遺伝子は元菌の精製酵素中には存在しなかったが,一次構造はキチナーゼIとホモロジーが見いだされた.キチナーゼIII遺伝子を大腸菌を用いて発現させ,菌体破砕後の無細胞抽出物を用いて組換え型のキチナーゼIIIを精製した.3.Aeromonas由来のキチナーゼの糖鎖の機能について糖鎖を持つAeromonasのキチナーゼIIと大腸菌を用いて発現させた組換え型キチナーゼII(糖鎖をもっていない)を調整し,種々の酵素化学的性質の比較検討を行った.その結果,最適作用pH,最適作用温度,熱,pH安定性,等電点など組換え型のキチナーゼは元菌由来のキチナーゼとほとんど同じ値を示した.しかし,プロテアーゼに対する抵抗性は元菌由来のキチナーゼの方が高かった.この結果より,キチナーゼIIに付加している糖鎖はプロテアーゼに対する抵抗性に関与していることが明らかとなった.

1. Aeromonas sp.No.10S-24 is produced in large quantities. Aeromonas is cultured in large quantities. The bacteria are removed from the medium. The crude enzyme solution is purified. The solution is purified by sulfur analysis. 2. Aeromonas sp.No.10S-24 Origin of the first generation of the first generation of the first 4. DNA Fragments were successfully obtained from DNA fragments. In addition to the original text, the original text of the original text. The residue of 2 kinds of bacteria is not present in the refined enzyme of the original bacteria, and the primary structure is not present in the enzyme. 3. The origin of Aeromonas and the function of carbohydrate lock. The function of carbohydrate lock. The results show that the optimum pH, optimum temperature, heat,pH stability, isoelectric point, isoelectric point, isoelectric The resistance of the bacteria is very high. As a result of this, the sugar lock is resistant to the disease and the sugar lock is resistant to the disease.