動物の自然発生腫瘍における多剤耐性遺伝子の変化とP糖蛋白質の発現

自发性动物肿瘤中多药耐药基因和 P-糖蛋白表达的变化

• 批准号: 07760305
• 负责人: 三好 宣彰
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760305/
• 关键词: 動物; 腫瘍; 多剤耐性遺伝子; 抗癌剤耐性; P糖蛋白質; 発現

多剤耐性遺伝子の正常組織におけるゲノムDNAの検索において、正常なウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタの精巣各4検体、および正常なニワトリの血液4検体よりゲノムDNAを抽出し、ヒトの抗癌剤多剤耐性遺伝子のひとつであるMDR1遺伝子断片をプローブとして用いて、サザンブロットハイブリダイゼイションを行った。ゲノムDNAを制限酵素EcoRI、BamHI、PstI、HindIIIで消化した結果、各種動物ともにヒトのMDR1遺伝子に関連する、あるいは相同性を有する遺伝子がゲノムDNA上に存在し、かつその存在状態には動物種特異性が認められた。なお、対照としては正常なヒト胎盤組織から抽出したゲノムDNAを用いた。MDR1遺伝子がコードするP糖蛋白質の正常組織における発現の検索では、健常なイヌ(雑種)より全身諸臓器を採取し、中性緩衝ホルマリン固定後、常法に従いパラフィン切片を作成して、ヒトP糖蛋白質に対するモノクローナル抗体を用いたABC法で免疫組織化学染色を行った。ヒトでは正常な副腎や腎臓の尿細管上皮細胞等で発現が認められるのであるが、イヌの組織では陽性反応が見られなかった。現時点では、染色前の切片に対する処理を、未処理およびトリプシン消化処理の2通りは行ったが、本抗体に対する陽性所見は得られていないため、マイクロウエーブ処理やオートクレーブ処理、あるいは再度、健常なイヌからの組織採取を行い、カルノア液やブアン液による固定等により、できる限りP糖蛋白質抗原を露出させることを目的とした方法での検索を現在実行中である。

The normal tissue of multi-drug resistant gene is characterized by DNA detection, normal tissue detection, normal tissue detection, tumor detection, tumor detection, and normal tissue detection. DNA restriction enzymes EcoRI, BamHI, PstI, HindIII are digested, and MDR1 genes are associated with various animal species. The normal placenta tissue was extracted from the placenta and DNA was used. MDR1 gene expression in normal tissues of P glycoprotein was detected by immunohistochemical staining using ABC method after normal tissue samples were taken, neutral buffer samples were fixed, and normal tissue sections were prepared. The normal kidney, kidney and urine tubule epithelial cells were detected. The present point is that the sections before staining are treated, untreated and digested, and the positive results of this antibody are obtained. P-Glycoprotein Antigen is Exposed to the Target