Bリンパ球アポトーシスにおける癌遺伝子、癌抑制遺伝子の役割に関する研究

癌基因和抑癌基因在B淋巴细胞凋亡中的作用研究

• 批准号: 07770132
• 负责人: 田崎 和洋
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770132/
• 关键词: ヒトBリンパ腫培養株; apoptosis; bcl-2; c-myc

1.ヒトBリンパ腫培養株HBL-6、HBL-9におけるc-myc、bcl-2遺伝子発現の検討Fas抗原陽性のヒトBリンパ腫培養株HBL-6とHBL-9を培養し、経時的な形態観察とDNA・RNA抽出を行った。その結果、HBL-9ではDNAのladder formationおよび形態学的観察にて24〜36時間でspontaneous apotosisを起こすことが確認されたが、HBL-6では60時間でもapotosisを生じなかった。さらにNorthern法にてc-myc、bcl-2遺伝子のmRNAの発現を検討したところ、HBL-9では24時間後にcontrolの約3倍のc-myc mRNAの発現が認められ、HBL-9のapotosisとc-myc遺伝子の一過性発現との関連が示唆された。一方、HBL-6ではc-mycの経時的な発現に大きな差異は認められなかった。bcl-2遺伝子に関しては、HBL-6・HBL-9ともに遺伝子発現は全く認められず、同遺伝子の関与については不明であった。今後さらに検討が必要と考えられる。2.培養細胞株HBL-9へのbcl-2遺伝子の導入ヒトbcl-2遺伝子cDNA(B4 fragment)をレトロウイルスベクターに挿入した組換え体ウイルスDNA(pBC140B4)をElectroporation法にてHBL-9に導入し、Neomycinによるselectionを行ったところ13個のコロニーを得た。これらの各コロニーからcell lysateを抽出しWestern法にてscreeningしたが、bcl-2蛋白を発現しているクローンは得られなかった。追試にても同様の結果を得た。従って、bcl-2蛋白の存在はHBL-9にとって不都合な環境をもたらす可能性が示唆され、HBL-9のapoptosisにおけるbcl-2蛋白の意義を考察する上で興味深い結果が得られた。

1. Research on Fas antigen of HBL-6, HBL-9, HBL-9, and bcl-2 genetically modified bacterial culture strains The positive のヒトB リンパ culture strains HBL-6 and HBL-9 were cultured and the morphological observation and DNA and RNA extraction were carried out.そのResults, HBL-9ではDNAのladder formationおよびMorphological observationにて24~36 timeでspontaneous apotosis こすことが confirmed されたが, HBL-6 では60 time でもapotosis を生じなかった.さらにNorthern method にてc-myc, bcl-2 remaining 伝子の発appears を検 Discussion したところ, HBL-9 では 24 time later にcontrol の approximately 3 times のc-myc The expression of mRNA is the same as that of HBL-9. On the one hand, the difference between HBL-6 and HBL-6c-myc is different. bcl-2 is a legacy of 伝子に关しては, HBL-6・HBL-9 is a legacy of 伝子発 appear は全く recognized められず, the same legacy of 伝子の关 and については remains unknown is であった. From now on, we will discuss the necessary and necessary tests. 2. Culture the cell line HBL-9 and introduce the bcl-2 gene cDNA (B4 fragment) DNA (pBC140B4) electropo ration method, HBL-9 import method, Neomycin selection method, 13 pieces of it. no cell lysate extraction method, Western screening method, bcl-2 protein extraction method, bcl-2 protein extraction method, and bcl-2 protein extraction method. The result of the pursuit is the same.従って、Bcl-2 protein exists and HBL-9 is not compatible with the environment and the possibility is indicated and HB The meaning of L-9 apoptosis and the bcl-2 protein are investigated and the results are obtained.