ネフローゼ症候群末梢血Tリンパ球由来血管透過性因子の精製とアミノ酸配列解析

肾病综合征外周血T淋巴细胞血管通透因子的纯化及氨基酸序列分析

• 批准号: 07770564
• 负责人: 鳥谷部 真一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770564/
• 关键词: ネフローゼ症候群; 血管透過性因子

特発性ネフローゼ症候群患児の末梢血Tリンパ球が産生する血管透過性因子(VPF)のN末端アミノ酸配列を解析する目的で下記の検討をおこなった.同一患者において,ネフローゼ期及び寛解期の患児Tリンパ球をConA存在下に培養して上清を得た.VPF活性は,既報の如く培養血管内皮細胞のアルブミン透過性を亢進させる活性と,直接マウスの尾静脈に培養上清を静注して尿中蛋白を増量させる活性の,二つで検討した.いずれの方法でもネフローゼ期にVPF活性を認めた.次に培養上清を濃縮してカラムクロマトグラフィーで分画し各分画のVPF活性を同様に測定したところ,分子量10kD前後からそれ以下の分画において強いVPF活性を認めた.そこで上清中の低分子量の蛋白を調べるために,培養上清をトリス-トリシンSDS-PAGEで解析した.ゲルに銀染色を施すと,寛解期の患児Tリンパ球培養上清と比較して,ネフローゼ期では12kDと6kDに相当するバンドがみられた.これらの蛋白のN末端アミノ酸分析を行うため,PDVF膜にエレクトロブロットし,CBB染色を行った.しかし蛋白量が少ないためかサンプルを濃縮しても,銀染色でみられた6kDのバンドはCBB染色ではみられなかった.12kDのバンドはかろうじてCBBでもみられたので,切り取って気相シークエンサーでN末端を解析した.しかしサンプルが少ないか,N末端がブロックされているため解析はできなかった.小児科領域では大量の検体を得られないという問題点がある.したがって今後は,differential display法,random amplified polymorphic DNA法などPCRを応用して,ネフローゼ期Tリンパ球に特異的なmRNAを分離する必要がある.

Objective: To analyze the N-terminal amino acid sequence of vascular permeability factor (VPF) in peripheral blood T lymphocyte production in children with idiopathic congenital leukemia syndrome. VPF activity was detected in the supernatant of cultured vascular endothelial cells in the presence of ConA during the development and remission stages of the same patient.VPF activity was reported in the supernatant of cultured vascular endothelial cells, such as increased permeability of the cells, and increased activity of protein in urine after intravenous injection of the supernatant directly into the tail vein. In the middle of the process, VPF activity was identified in the future. The VPF activity of the subculture supernatant was determined in the same way, and the VPF activity of the subculture supernatant was determined before and after the molecular weight of 10kD. SDS-PAGE analysis of culture supernatant was carried out. The silver stain was applied, and the supernatant of the culture medium was compared with the supernatant of the culture medium at the 12kD and 6kD. The N-terminal amino acid analysis of this protein was carried out, and the PDVF membrane was stained with CBB. The amount of protein was reduced to 6 kD by silver staining and concentrated to 6 kD by CBB staining. CBB staining was reduced to 6kD by silver staining and concentrated to 6kD by CBB staining. CBB staining was reduced to 6 kD by silver staining and concentrated to 6 kD by CBB staining. The end of the N terminal is the end of the N terminal. A large number of problems have been identified in the field of small subjects. In the future,differential display method,random amplified polymorphic DNA method, PCR and DNA sequencing are necessary.