デヒドロエピアンドロステロンレセプターのcDNAクローニング

脱氢表雄酮受体的cDNA克隆

• 批准号: 07770831
• 负责人: 岡部 泰二郎
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770831/
• 关键词: DHEA; DHEAレセプター

1.DHEAレセプターがステロイドレセプタースーパーファミリーに属すると仮定した場合のstrategy1)DEHAレセプターを高発現した活性化PEER細胞より抽出したRNAから作製した一本鎖cDNAを鋳型として、C19,C21のステロイドレセプターサブファミリーのP box,D box部分のアミノ酸をコードするdegenerate primerを用いてPCRにて増幅した。増幅したDNA産物をプラスミドに組み込み、22個のクローンをランダムにシークエンスしたが、11個がグルココルチコイコレセプター、2個がミネラルコルチコイドレセプター、残りはアーチファクトであった。2)ヒトPPARγのDNA結合領域をプローブにして、活性化PEER細胞により作製したcDNAライブラリーをスクリーニングし、nur77ファミリーに属する新しいcDNAをクローニングした。全長cDNAを線維芽細胞に高発現させDHEA結合活性を調べたが、DHEA結合活性は検出できなかった。2.DHEAレセプターがスエロイドレセプタースーパーファミリーに属さない場合のstrategy活性化PEER細胞より作製したexpression library約90、000個を、500個ずつのプールに分け、COS7細胞にtransfect後、DHEA結合活性をBAS2000のimage analyserを用いて解析したが、ポジティブなクローンを得ることはできなかった。3.今後の方針現在、DHEA結合活性のあるものとないものを差を、differential display法、cDNA subtraction法にて解析している。

1. DHEA レ セ プ タ ー が ス テ ロ イ ド レ セ プ タ ー ス ー パ ー フ ァ ミ リ ー に genus す る と 仮 set し た occasions の strategy1) DEHA レ セ プ タ ー を high 発 now し た activeness PEER cells よ り spare し た RNA か ら cropping し た a lock cDNA を type where と し て and C19, C21 の ス テ ロ イ ド レ セ プ タ ー サ ブ フ ァ ミ リ ー の P box, box part D の ア ミ ノ acid を コ ー ド す る degenerate primer を with い て PCR に て rights of し た. Good picture し た DNA product を プ ラ ス ミ ド に group み 込 み, 22 の ク ロ ー ン を ラ ン ダ ム に シ ー ク エ ン ス し た が, 11 が グ ル コ コ ル チ コ イ コ レ セ プ タ ー, 2 が ミ ネ ラ ル コ ル チ コ イ ド レ セ プ タ ー and residual り は ア ー チ フ ァ ク ト で あ っ た. 2) ヒ ト PPAR gamma の dna-binding domain を プ ロ ー ブ に し て, active PEER cells に よ り cropping し た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を ス ク リ ー ニ ン グ し, nur77 フ ァ ミ リ ー に genus す る new し い cDNA を ク ロ ー ニ ン グ し た. Full length cDNA を line high dimensional bud cells に 発 now さ せ DHEA binding activity を adjustable べ た が activity, as well as the combination of DHEA は 検 out で き な か っ た. 2. DHEA レ セ プ タ ー が ス エ ロ イ ド レ セ プ タ ー ス ー パ ー フ ァ ミ リ ー に genus さ な い occasions の strategy activeness PEER cells よ り cropping し た expression Library of about 90, 000 を, 500 ず つ の プ ー ル に け, に COS7 cells after transfect activity, as well as the combination of DHEA を BAS2000 の image analyser を with い て parsing し た が, ポ ジ テ ィ ブ な ク ロ ー ン を have る こ と は で き な か っ た. 3. In the future, the binding activity of DHEA will be analyzed in the following direction: <s:1> ある とな とな を を を を を differential display method, cDNA subtraction method にて, <s:1> て る る.