細胞外ATPによる内耳蝸牛らせん神経節細胞の細胞内Ca^<2+>動態に関する研究

利用细胞外ATP研究内耳蜗螺旋神经节细胞内Ca^<2+>动态

基本信息

批准号：
07771496
负责人：
原田成信
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771496/
关键词：
らせん神経節細胞 ATP 細胞内カルシウム濃度 Fura-2 蝸牛求心性神経伝達物質

项目摘要

正常モルモットの蝸牛よりらせん神経節細胞を単離した。単離された細胞は、すでに報告されているのと同様に、細胞体に髄鞘を持ったType I と髄鞘を持たないType IIとが観察され、今回の実験では両者を用いた。単離されたらせん神経節細胞に100μMのATPを30秒間投与したところ、一過性の細胞内Ca^<2+>濃度の上昇反応が見られた。そしてこの反応は、再現性及び濃度依存的上昇反応を示した。また、ATPの受容体であるP_2-receptorのアンタゴニストであるReactive Blue 2 および Suramin の存在下では、ATP(100μM)による細胞内Ca^<2+>濃度の上昇反応は濃度依存的に抑制された。これらのことより、らせん神経節細胞にはP_2-receptorが存在することが示唆された。次に、細胞外液をCa^<2+>-freeの状態にして100μMのATPを投与したところ、一過性の細胞内Ca^<2+>濃度の上昇反応が見られたが、その上昇度は、細胞外液にCa^<2+>の存在する状態に比べて低かった。このことより、ATPによる細胞内Ca^<2+>濃度の上昇反応におけるCa^<2+>の流入経路は、外部動員と内部動員の両方によることが示唆された。また種々のアゴニストの効力比では、ATP-γ-S>ATP>>α、β-Me-ATPの順となり、P_2-receptorのサブタイプはP_<2y>-receptorが優位であることが示唆された。以上の細胞外ATPによるらせん神経節細胞の反応より、内耳における細胞外のATPは、求心性の神経伝達物質としての役割を果たしている可能性が考えられた。

从正常豚鼠的耳蜗中分离出螺旋神经节细胞。如前所述，用I型观察到分离的细胞在细胞体中用髓磷脂鞘和II型观察到，没有髓磷脂鞘，并且在该实验中都使用了。当将100μM的ATP施用到分离的螺旋神经节细胞30秒钟时，观察到细胞内Ca^<2+>浓度的短暂增加。然后，该反应表现出可重复性和浓度依赖性升高反应。此外，在存在反应性蓝2和苏拉蛋白的存在下，P_2受体的拮抗剂，ATP的受体，以浓度依赖性方式抑制了ATP（100μM）的细胞内Ca^<2+>浓度的增加。这些结果表明，螺旋神经节细胞中存在P_2受体。接下来，当将细胞外流体放置在CA^<2+> - 游离状态和100μMATP中时，观察到细胞内Ca^<2+>浓度的短暂增加，但增加的增加小于细胞外液中的浓度。这表明Ca^<2+>的涌入途径在响应中对ATP的细胞内Ca^<2+>浓度的增加是由外部和内部募集引起的。此外，在各种激动剂的效力比中，ATP-γ-S> atp >>α和β-ME-ATP，表明P_2-apector在P_2-Repeptor的亚型中占主导地位。基于细胞外ATP对螺旋神经节细胞的上述反应，被认为内耳的细胞外ATP可能起作用，是传入的神经递质。