コラーゲンゲル三次元培養による角膜実質細胞の増殖・分化及び走行性の検討

使用三维胶原凝胶培养检查角膜基质细胞的增殖、分化和迁移

• 批准号: 07771543
• 负责人: 南 洋一
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: 佐賀医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771543/
• 关键词: 角膜実質細胞; 強膜実質細胞; 実質細胞の走行性; 再構築培養

目的:同じ間葉系のneural crest由来でる生体の角膜実質細胞および強膜実質細胞は、それぞれの膠原線維の太さや配列に明らかに違いがある。Ocular surfaceを構成する角膜上皮及び結膜上皮が、これらの実質細胞の走行性にどのような影響を及ぼすかをそれぞれの再構築培養条件下にて検討した。方法:牛眼球から角膜、結膜、強膜を分離し、それらをそれぞれ酵素的に消化して角膜上皮細胞・角膜実質細胞・結膜上皮細胞・強膜実質細胞を単離して得た。それらを20%胎仔牛血清を含むMEMで培養した。次にそれらの細胞をトリプシンにて完全単離細胞にして、角膜実質細胞と強膜実質細胞をI型コラーゲン・ゲルにて三次元的に包埋し培養し、更にこれらの三次元的に培養したものの表層に角膜上皮細胞及び結膜上皮細胞を播種して再構築培養した。この再構築培養系で角膜実質細胞と強膜実質細胞の走行性を比較検討した。結果:強膜実質細胞は角膜上皮細胞の存在や結膜上皮細胞が存在する場合では、実質細胞の配列は上皮細胞の存在する近くでは平行配列が見られたが、上皮細胞から遠く離れると平行配列は乱れていた。角膜実質細胞は、角膜上皮細胞の存在下で全層性に整然と平行配列を呈するのに対し、結膜上皮細胞の存在下では平行配列を示すものの角膜上皮の存在する場合と比べて平行配列は不整な部分も見られ結膜上皮による影響は弱かった。結論:再構築培養条件下では角膜上皮細胞は角膜実質細胞の走行性に強く影響を与え、強膜実質細胞の配列にも関与していると考えれた。しかし、結膜上皮細胞は角膜実質細胞の走行性に与える影響は弱く、強膜実質細胞は上皮の存在下でも整然とした平行配列は見られなかった。

Objective: to study the origin of neural crest in vivo, cornea, dura mater, dura mater, epidermis, epithelium, cornea, cornea and cornea. The corneal epithelium and membranous epithelium of the Ocular surface were isolated, and the cells of the corneal epithelium and the membranous epithelium were divided into two groups. Methods: bovine eyeball cornea, endomembrane, dura mater separation, digestion of enzyme, corneal epithelium, strong membrane cell isolation were successfully detected. 20% fetal bovine serum contains MEM. The secondary cell culture was used to completely isolate the cell culture, the corneal cell, the dura mater cell, the type I cell, the three-dimensional embedded cell culture, the third-dimensional cell culture table, the corneal epithelial cell culture and the terminal membrane epithelial cell culture. The growth of the cornea, the dura mater of the cornea and the dura mater of the cornea is much higher than that of the cornea. Results: there were membrane epithelial cells, epithelial cells and epithelial cells. In the presence of corneal epithelial cells and corneal epithelial cells, the parallel alignment of corneal epithelial cells and corneal epithelial cells showed the presence of corneal epithelial cells, the presence of corneal epithelial cells and the presence of corneal epithelial cells. Results: under the condition of re-culture, the growth of corneal epithelial cells, corneal epithelial cells and dura mater cells were strongly correlated with each other. In the presence of membrane epithelial cells, corneal epithelial cells, corneal epithelial cells,