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C_1微生物に特異な代謝系酵素の諸特性の解明とその応用

C_1 阐明微生物特有的代谢酶的各种特性及其应用

基本信息

批准号：
08660111
负责人：
和泉好計
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度の研究実績は次のようにまとめられる.メタノール資化経路の一つであるセリン経路はイソクエン酸リアーゼ(ICL)の有無によってicl^+セリン経路とicl^-セリン経路に分類されている。これまで、Hyphomicrobium属細菌はicl^-セリン経路を有すると考えられてきたが、我々は非常に不安定なICL活性がすべてのHyphomicrobium属細菌に分布することを明らかにしてきた。本研究ではL-セリン生産菌のH.methylovorum GM2よりICLを精製し、その諸性質について検討した。標準緩衝液(リン酸カリウム緩衝液、pH7.0)に10%グリセロールを添加することにより本酵素活性の安定化を試み、メタノールを単一炭素源として生育したH.methylovorum GM2の菌体を超音波破砕後、硫安分画(30-60%)、各種カラムクロマトグラフィーを用いてICLを精製した。本酵素はpH7.5、40℃で最大活性を示し、サブユニット分子量は62,000Daであった。また本酵素活性は他起源ICLと同様にMg2+要求性であり、コハク酸によって強く阻害された。本酵素のN末端アミノ酸配列と他起源ICLの一次構造を利用し、PCR法によってICL遺伝子の一部を得た.この遺伝子断片をプローブとして本酵素遺伝子のクローニングに成功した。

This year's research performance is very good. A list of information systems is included in the list of information systems. The list of information systems is included in the list of information systems (ICL). The Hyphomicrobium bacteria are very unstable in ICL activity. The Hyphomicrobium bacteria are distributed in different ways. In this study, the purification and characterization of ICL from H.methylovorum GM2 were investigated. Standard buffer solution (acid buffer solution, pH 7.0): 10% of the total solution added to stabilize the enzyme activity, 10% of the microorganism activity, 10% of The enzyme has a maximum activity at pH 7.5 and a molecular weight of 62,000 Da at 40℃. This enzyme activity is similar to that of ICL and Mg2 +. The N-terminal amino acid sequence of this enzyme was used to construct the primary structure of ICL and a part of ICL gene was obtained by PCR. The enzyme fragments were successfully extracted from the genome.