C_1微生物に特異な代謝系酵素の諸特性の解明とその応用

今年度の研究実績は次のようにまとめられる.メタノール資化経路の一つであるセリン経路はイソクエン酸リアーゼ(ICL)の有無によってicl^+セリン経路とicl^-セリン経路に分類されている。これまで、Hyphomicrobium属細菌はicl^-セリン経路を有すると考えられてきたが、我々は非常に不安定なICL活性がすべてのHyphomicrobium属細菌に分布することを明らかにしてきた。本研究ではL-セリン生産菌のH.methylovorum GM2よりICLを精製し、その諸性質について検討した。標準緩衝液(リン酸カリウム緩衝液、pH7.0)に10%グリセロールを添加することにより本酵素活性の安定化を試み、メタノールを単一炭素源として生育したH.methylovorum GM2の菌体を超音波破砕後、硫安分画(30-60%)、各種カラムクロマトグラフィーを用いてICLを精製した。本酵素はpH7.5、40℃で最大活性を示し、サブユニット分子量は62,000Daであった。また本酵素活性は他起源ICLと同様にMg2+要求性であり、コハク酸によって強く阻害された。本酵素のN末端アミノ酸配列と他起源ICLの一次構造を利用し、PCR法によってICL遺伝子の一部を得た.この遺伝子断片をプローブとして本酵素遺伝子のクローニングに成功した。

今年度の研究実績は次のようにまとめられる.メタノール資化経路の一つであるセリン経路はイソクエン酸リアーゼ(ICL)の有無によってicl^+セリン経路とicl^-セリン経路に分類されている。これまで、Hyphomicrobium属細菌はicl^-セリン経路を有すると考えられてきたが、我々は非常に不安定なICL活性がすべてのHyphomicrobium属細菌に分布することを明らかにしてきた。本研究ではL-セリン生産菌のH.methylovorum GM2よりICLを精製し、その諸性質について検討した。標準緩衝液(リン酸カリウム緩衝液、pH7.0)に10%グリセロールを添加することにより本酵素活性の安定化を試み、メタノールを単一炭素源として生育したH.methylovorum GM2の菌体を超音波破砕後、硫安分画(30-60%)、各種カラムクロマトグラフィーを用いてICLを精製した。本酵素はpH7.5、40℃で最大活性を示し、サブユニット分子量は62,000Daであった。また本酵素活性は他起源ICLと同様にMg2+要求性であり、コハク酸によって強く阻害された。本酵素のN末端アミノ酸配列と他起源ICLの一次構造を利用し、PCR法によってICL遺伝子の一部を得た.この遺伝子断片をプローブとして本酵素遺伝子のクローニングに成功した。