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哺乳動物の卵子成熟を制御する遺伝子の同定と卵細胞質内因子の変化に関する研究

哺乳动物卵母细胞成熟控制基因的鉴定及卵母细胞胞质因子变化的研究

基本信息

批准号：
08660340
负责人：
内藤邦彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660340/
关键词：
卵子成熟 p34^<cdc2>サイクリンB MAPキナーゼ c-mos ディファレンシャルディスプレイ

项目摘要

1、豚卵子-卵丘複合体(pCOC)は成熟分裂を開始するために培養20時間以内にmRNAの合成が必要であることが分かっていた。そこで培養前のpCOCと20時間培養後のpCOCからmRNAを単離してRT-PCRによるディファレンシャルディスプレイを用い卵子成熟を制御する遺伝子の同定を試みた。その結果20時間培養後のpCOCに特異的と思われるバンドが複数検出された。この中から6本のバンドを選んでサブクローニングし、合計44個のクローンを得た。これらをプローブとして新たに作成したcDNAライブラリーより実際に20時間培養後のpCOCに特異的に発現している遺伝子を探したが、現在までのところいずれのクローンも培養前と20時間培養後のpCOCの両者に発現している事が明かとなり、20時間培養後の特異的な遺伝子は得られていない。ディファレンシャルディスプレイからは、まだ多数の候補バンドが存在するので今後さらにサブクローニングの数を増やして検討していく予定である。2、卵成熟を制御する卵細胞内因子の変化に関してはp34^<cdc2>、サイクリンB、c-mos,MAPキナーゼについて調べた。p34^<cdc2>、サイクロンBに関しては特に成熟卵における、結合状態、リン酸化状態について豚とマウスで比較した。その結果マウスではサイクリンBの合成と分解は平衡状態にあり濃度の変化はないが、豚ではサイクリンBの分解が遅く、過剰のサイクリンBはcdc2と結合した後リン酸化されてpre-MPFとして蓄積されることが明かとなった。c-mosの卵成熟に対する役割についてはマウス卵で実験を行い、成熟の開始には不必要だが第一減数分裂から第2減数分裂への移行に必要であることが示された。MAPキナーゼの作用については豚卵子で実験を行い、成熟分裂開始直前に細胞質から核内へ移行すること、核内へ移行した活性型MAPキナーゼは卵成熟を誘起することがあきらかとなった。

1. The mature division of porpoise ovum-cumulus complex (pCOC) begins and the synthesis of mRNA is necessary within 20 hours of culture. RT-PCRによるディファレンシャルディスプレイを Use いovum mature をcontrol する伝子の同定をtrialみた.そのResults: と思われるバンドがplural 検出された specific to pCOC after 20 hours of culture. You can choose 6 of the の中からのバンドをんでサブクローニングし, a total of 44 のクローンを.これらをプローブとして新たに成したcDNAライブラリーより実记に20 After time cultivation, pCOC's specific に発appears and remainsところいずれのクローンもpCOC before culture and after 20 hours of culture It is a special thing that has been cultivated for 20 hours.ディファレンシャルディスプレイからは、まだMost candidate バンドが exists するので future さらにサブクローニングのnumber を Increase やして検していく気ある. 2. When the egg matures, it controls the factors inside the egg cell. p34^<cdc2>, サイクロンBに关しては特に mature egg における, combined state, リンacidified state についてdolphin とマウスで compare した.そのRESULTS マウスではサイクリンBのdegradationはequilibrium stateにありconcentrationの変化はないが、dolphinではサイクリンBのdegradationが遅く, されのサイクリンBはcdc2とcombinationした后リンacidificationされてpre-MPFとして Accumulationされることが明かとなった. c-mos's egg is ripe and mature The first meiosis is unnecessary and the second meiosis is transition. It is necessary and necessary. The function of MAP is to move the guinea pig egg into the cytoplasm and into the nucleus immediately before the start of mature division. The active type of MAP that is active in the nucleus and migrates in the nucleus is the egg that matures and is induced by the MAP.