虚血網膜における細胞内カルシウム濃度の変化

缺血视网膜细胞内钙浓度的变化

• 批准号: 08672005
• 负责人: 石黒 誠一
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672005/
• 关键词: 虚血; 網膜スライス; 細胞内カルシウム; fluo-3

目的:虚血網膜障害に重要な役割を為す細胞内カルシウム濃度を、網膜スライスモデルを使って測定する。材料と方法:体重約150〜200gのSDラット眼球を用いた。リンガー液に10mMのグルコースと2%のアガロースを加え、加熱してアガロースを溶かす。95%O_2/5%CO_2を飽和させながら25℃まで冷却したものに新鮮な網膜を浸し、氷中で固まらせる。ただちに組織の薄切装置で400μmの網膜切片を作成する。10mMのfluo-3を含むグルコース含有リンガー液に切片を30分間浸し、さらに30分間グルコース含有リンガー液にてfluo-3を洗う。灌流装置に切片を固定し、95%O_2/5%CO_2飽和グルコース含有リンガー液中で安定した後、95%N_2/5%CO_2飽和マニトール含有リンガー液に交換し、細胞内カルシウムの濃度を測定するためにメリディアン社製の共焦点レーザー顕微鏡で画像を取り込んだ。励起波長は506nmで螢光波長は526nmを使用した。結果:網膜内層では、95%N_2/5%CO_2飽和マニトール含有リンガー液に交換するとすぐに細胞内カルシウム濃度は上昇した。5分後にプラトーに達し、さらに5分ほどすると再びカルシウム濃度は上昇していった。95%N_2/5%CO_2飽和マニトール含有リンガー液にしてから5分以内に95%O_2/5%CO_2飽和グルコース含有リンガー液中に戻すと元に戻るが、10分以上経つと戻りにくかった。網膜外層では、基本的には網膜内層と似た応答をするが、上昇と戻りのカーブがゆっくりとしていた。結論:網膜スライスで虚血モデルを再現することが出来、細胞内カルシウムの応答を調べることが出来たが、組織の作製方法や螢光色素の選択などでまださらに検討を要すると考えられた。

Objective: To determine the intracellular concentration of the essential components of retinal injury caused by hypoxemia. Material and method: Weight about 150 ~ 200g SD and eye use. 10mM solution, 2% solution, heating solution 95%O_25%CO_2 saturation temperature is 25℃, cooling temperature is 25 ℃. The tissue slice device was used to prepare 400μm retinal slices. 10mM fluo-3 in a solution containing a solvent for 30 minutes, then 30 minutes in a solution containing a solvent for fluo-3 Perfusion apparatus: After fixation, 95%O_2/5%CO_2 saturation, the solution containing the solution was stabilized, and 95%N_2/5%CO_2 saturation, the solution containing the solution was exchanged, and the concentration of the intracellular solution was determined. Excitation wavelength 506nm, fluorescence wavelength 526nm. Results: 95%N_2/5%CO_2 saturation in the inner layer of retina increased the intracellular concentration of N_2/5%CO_2. After 5 minutes, the concentration of the drug increased. 95%N_2/5%CO_2 saturated solution contains less than 5 minutes of nitrogen and 95%O_2/5%CO_2 saturated solution contains more than 10 minutes of nitrogen. The outer layer of the retina, the basic layer of the retina, the inner layer of the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the lower layer of the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the lower layer of the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the lower layer of the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the lower layer of the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the lower layer of the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the retina, the upper layer of the retina, the lower layer of the retina, the retina, Conclusion: Reproduction of retinal pigment, regulation of intracellular pigment, preparation of tissue and selection of fluorescent pigment are important.

项目成果

Nishikawa, S. , Ishiguro, S. , Tamai, M.: "Proline-evoked intracellular calcium levels in the rat retinal slices." (ARVO Abstracts) Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.37. S629- (1996)

Nishikawa, S.、Ishiguro, S.、Tamai, M.：“大鼠视网膜切片中脯氨酸诱发的细胞内钙水平。”