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Notch細胞質領域のリガンド依存的な切断部位の特定、及びプロテアーゼの同定

Notch胞质区配体依赖性切割位点的鉴定和蛋白酶的鉴定

基本信息

批准号：
10163219
负责人：
黒岡尚徳
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10163219/
关键词：
Notch processing プロテアーゼ阻害剤 MG132 プロテアソーム阻害剤 Lactacystin カルパイン Delta

项目摘要

マウスNotch 1の細胞外領域を大部分欠失させたコンストラクト(ΔE)は、リガンド非依存的に膜貫通領域と細胞質領域の境界付近でprocessingを受けることが最近報告され、またこのprocessingはプロテアーゼ阻害剤の1つであるMG132によって阻害されることが示されている。MG132はプロテアソーム阻害剤である為、他のプロテアソーム阻害剤であるLactacystin、及びその誘導体であるclasto-Lactacystin β-lactonの効果を検討したが、ΔEのprocessingは阻害されなかった。Lactacystinはプロテアソーム特異的阻害剤であるのに対し、MG132はカルパインなど他のプロテアーゼも阻害することから、ΔEがカルパインである可能性が示唆されたが、カルパイン特異的阻害剤では効果がないことから、MG132はそれ以外のプロテアーゼを阻害している可能性が考えられる。またΔEのprocessingの程度が細胞の種類で異なるのかを検討したが、調べたすべての細胞でprocessingが認められた。Notchを発現していない細胞でもこのprocessingは認められることから、ΔEを切断するプロテアーゼはNotch蛋白質以外にも基質を持つものと考えられる。また我々は、マウスNotch 1の細胞質領域を大部分欠失させたコンストラクト(ECRAM)を安定に発現した細胞株(N6 cells)を樹立し、既に樹立済であるD10 cells(NotchリガンドであるDeltaを安定に発現した細胞株)と共培養したときにも同様にprocessingが生じ、やはりMG132によってそのprocessingを阻害されることを確認した。

Most of the extracellular fields of Notch 1 are missing, the membrane is independent of the field of communication, the field of cell, the field of field is close to the level of processing. The latest report, the report, the processing, the block, the block, the MG132, the block, the cell, the field, the field, the domain, the field, the MG132 is responsible for reducing the impact on the Lactacystin, and on the monitoring of the clasto-Lactacystin β-lacton. The results show that the processing affects the performance of the system. Lactacystin