マクロファージ・NK細胞・γδTリンパ球の結核菌によるアポトーシスの研究

结核杆菌引起巨噬细胞、NK细胞、γδT淋巴细胞凋亡的研究

• 批准号: 10670542
• 负责人: 鈴木 克洋
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10670542/
• 关键词: アポトーシス; 末梢血単核球分画; 単球由来マクロファージ; NK細胞; 抗酸菌; サイトカイン; 結核菌

正常ヒト由来の末梢血単核球分画(PBMC)、単球由来マクロフファージ(MDM)、NK細胞のアポトーシスに対する各種抗酸菌感染とサイトカイン投与の影響を検討した。PBMCは末梢血から比重遠心法で採取した。MDMはPBMC中の付着細胞を培養することで形成した。CD56抗体を用い磁気ビーズ法にて陽性選択した細胞をNK細胞と考えた。細胞は全て5%ヒトAB型血清加RPMI1640中で培養した。アポトーシスは全てTUNEL法を用い、FACSCANによるflow cytometryにて定量化した。一部細胞はDAPIを用いた核染色を行い蛍光顕微鏡での観察でアポトーシスの確認を行った。PBMCは培養後経時的にアポトーシス細胞の比率が増加し、培養6日目で約51%となった。結核菌(H37Rv)やM.avium complexの感染はこのアポトーシスの比率を低下させた。MDMのアポトーシスは結核菌の感染で亢進した。同菌の感染の有無に関わらず、IL-2またはIFN-γの投与はMDMのアポトーシスの抑制傾向を、一方TNF-αの投与はアポトーシスの促進傾向を示した。未感染のNK細胞のアポトーシスはIL-12またはIL-18の投与で抑制されたが、結核菌を感染させた場合IL-12やIL-18投与のアポトーシス抑制作用は全く認められなかった。以上の感染実験は全て安全キャビネット内で行い、10%ホルマリンにて1時間処理する事で完全に滅菌した後に各種アッセイを実施した。

To investigate the effects of different acid-fast bacterial infections and cell culture on peripheral blood mononuclear cell (PBMC), lymphocyte (MDM) and NK cell populations PBMC peripheral blood density remote method MDM cells were cultured in vitro. CD56 antibody is used in the detection of NK cells. Cells were cultured in 5% AB-type serum plus RPMI1640. Flow cytometry was quantified by TUNEL and FACSCAN. A part of the cells were stained with DAPI and examined by microscopy to confirm the presence of DAPI. The percentage of PBMC cells in culture increased after 6 days and reached 51%. Tuberculosis (H37Rv) and M.avium complex infection rates are low. MDM infection is not easy. There is no correlation between the infection of the same bacteria, IL-2 and IFN-γ, and the inhibition tendency of MDM, and the promotion tendency of TNF-α. IL-12 and IL-18 inhibit the proliferation of uninfected NK cells, and IL-12 and IL-18 inhibit the proliferation of tuberculosis cells. The above infection is completely safe, 10% safe, and 1 time to process.

项目成果

Eisaku Tanaka,Katsuhiro Suzuki et al.: "Effect of clarithromycin regimen for Mycobacterium avium using a competive PCR method"Am.J.Respir.Crit.Care Med.. 160・3. 866-872 (1999)

Eisaku Tanaka、Katsuhiro Suzuki 等：“使用竞争性 PCR 方法的克拉霉素方案对鸟分枝杆菌的影响”Am.J.Respir.Crit.Care Med.. 160・3 (1999)。

Katsuhiro Suzuki, et al.: "Effect of proton pump inhibitor alone or in combination with clarithromycin on Mycobacterial growth in human alveolar macrophages"FEMS Microbiology Letter.. 182. 69-72 (2000)

Katsuhiro Suzuki 等人：“单独使用质子泵抑制剂或与克拉霉素联合使用对人肺泡巨噬细胞中分枝杆菌生长的影响”FEMS Microbiology Letter.. 182. 69-72 (2000)

Toru Hashimoto,Katsuhiro Suzuki: "Identification and semiquantitation of Mycobacterium avium using a competive PCR method"Microbiol Immunol.. 43・9. 821-827 (1999)

桥本彻、铃木胜宏：“使用竞争性 PCR 方法鉴定和半定量鸟分枝杆菌”微生物免疫学.. 821-827 (1999)。