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ラット・マウス全胚培養下の遺伝子制御による心奇形関連遺伝子の研究

通过大鼠和小鼠全胚胎培养的基因调控研究心脏畸形相关基因

基本信息

批准号：
10877168
负责人：
西順一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス全胚培養において心形成関連遺伝子eHANDアンチセンスオリゴヌクレオチドのマイクロインジェクションの影響を検討した。妊娠7.5日(膣栓確認を胎生0日)のICRマウス胎芽を摘出,Rotator systemの全胚培養を行った。eHAND遺伝子のmRNA開始コドンから20merの長さのアンチセンスS化(phosphorotioate型)オリゴヌクレオチドを作成し,PBSに溶解後,10μMの濃度で,胎生8.0日の羊膜腔内へ0.5μlマイクロインジェクションした。コントロールとして同部位のセンスS化オリゴヌクレオチドおよびPBSを同様に投与した。胎生10日の胎芽を形態観察した。FITCでラベルしたアンチセンス・オリゴを同様に投与し,4時間後、10時間後ともに,heart tube内に取り込まれていることを確認した。eHANDの蛋白発現をWestern blotingで検討し,投与5時間後の胎芽と胚外の膜組織でセンス投与に比べてアンチセンス投与で蛋白発現の抑制が見られた。10.0日胚の発育は,センス・アンチセンス群ともコントロールにくらべて発育不全が見られたが、アンチセンス群で有意に著明であった。心臓の形態では、明らかな形成不全はみられなかったが、アンチセンス群の一部(26.7%)にループ異常を認めた。アンチセンス投与群でのループ異常は、ループ形成におけるeHANDの何らかの関与を示唆するものと考えられた。

To investigate the effect of the gene expression on the formation of the embryo in whole embryo culture. ICR on day 7.5 of gestation (day 0 of embryo birth confirmed by plug), whole embryo culture of Rotator system. eHAND gene mRNA start point to 20mer long chain reaction (phosphoinoate-type) to make the first step,PBS dissolved, 10 μM concentration, fetal 8.0 days of amniotic cavity 0.5μl of the first step. The same part of the game is played by PBS. 10 days after birth, the embryo bud morphology was observed. FITC is the first to confirm that the heart tube is open after 4 hours and 10 hours. Western blotting of eHAND protein expression was observed in embryonic buds and extraembryonic membrane tissues 5 hours after administration. 10.0 The development of the embryo is incomplete, and the development of the embryo is intentional A portion of the heart's morphology (26.7%) was incomplete. A study of the relationship between eHAND and the formation of group abnormalities