昆虫培養細胞の初期化による形態形成能の回復に関する研究

重编程培养昆虫细胞恢复形态发生能力的研究

• 批准号: 11142210
• 负责人: 三橋 淳
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11142210/
• 关键词: 昆虫細胞培養; 初期胚; 初代培養; 細胞増殖; 細胞分化

昆虫の培養細胞にも初期化現象が見られるかどうかを明らかにするため、まず昆虫の培養細胞で全能性をもつものが作れるかどうか、カイコガ発生初期数段階の卵を用いて培養を試みた。まず卵を70%エタノールで減菌し、取り出した卵内容物をMGM-464培地に牛胎児血清を20%加えたもので培養した。産卵後8時間以前の卵の内容物を培養した場合は、細胞は得られなかった。この時期は未だenergidの状態で、細胞はできていないためと思われた。15時間卵では、わずかに胚盤葉と思われる半透明の細胞シートが見られたが、これを培養すると短時間の内に細胞遊出が起こった。遊出した細胞は卵黄細胞と胚細胞で、胚細胞の一部は分裂して増殖した。培養の初期には球状の細胞が主体をなしていたが、日数を経るにつれ数種の形の異なった細胞が見られるようになった。まず一部に赤色色素をもつ漿膜細胞が分化してきた。また1ヶ月を経過する頃には、神経細胞と思われる樹脂状突起をもつ細胞も見られ、簡単なニューロンのネットワークを形成した。20時間以後の卵からの培養でも細胞の遊出と分化は同様に起こった。40時間の胚細胞の培養では、遊出しmonolayerを形成していた一群の細胞が、培養40日頃からcontractionを始めた。以上の結果から、初期胚の培養では胚盤葉が形成されれば、培養可熊であり、連続継代性細胞系を作出できる可能性があることが分かった。しかし、このような初期胚の培養に於いても、培養中に分化が起こるので、全能性のある細胞系を得るには、増殖した細胞をクローニングして、未受精卵等に移植して発生が起こるか否かを調べる必要があると考えられた。

The phenomenon of insect culture cell initiation is observed in the culture cell totipotency of insect culture cell. Eggs are 70% sterile, egg contents are taken from MGM-464 and fetal bovine serum is 20% cultured. 8 hours after spawning, the contents of the eggs are cultured, and the cells are cultured. The time period is not yet energid, and the cell is not in a state of mind. 15 hours after the egg was hatched, the translucent cells began to swim out of the egg. The egg yolk cell and embryo cell are divided into two parts. In the early stage of culture, spherical cells are mainly cultured in different days, and several different cells are cultured in different days. A part of the red pigment is divided into serosal cells. In the past few years, the number of resin-like protrusions in the brain has increased. After 20 hours of incubation, the cells migrated out and differentiated. 40 days after the embryo cell culture began, a colony of cells was formed. The above results show that the embryonic culture can be used to form blastoderm leaves, and the possibility of continuous generation of cell lines can be divided into two parts. Culture of embryonic embryos in culture, differentiation in culture, totipotency in cell lines, propagation in cells, transfer of unfertilized eggs, etc.