エンバクの冠さび病抵抗性遺伝子ファミリーのクローニング

燕麦抗冠锈病基因家族的克隆

• 批准号: 11876010
• 负责人: 眞山 滋志
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11876010/
• 关键词: エンバク; 抵抗性遺伝子; ファイトアレキシン; 冠さび病菌; Puccinia coronata; セリン・スレオニンキナーゼ

昨年に引き続き、エンバクの病害抵抗性発現の初期認識遺伝子-抵抗性遺伝子-をクローニングするため、既報のセリン・スレオニンキナーゼ保存領域を参考に新たなプライマーをデザインし、PCR増幅を行った。得られたバンドをプラスミドにクローニング後、シークエンスを行ったが、最終的に目的の断片は得られなかった。一方、エンバクの病害抵抗性における後期発現遺伝子のクローニングを試みたところ、ファイトアレキシン(Avenanthramide)合成に関与する鍵酵素CCoAOMTおよびHHTの遺伝子を得ることに成功した。CCoAOMT遺伝子はサブトラクション法により、HHT遺伝子はdegenerate primerを用いたPCR法により得た。前者はalfalfa,parsleyなどのCCoAOMT遺伝子と、また後者はcarnationのHCBT遺伝子とそれぞれアミノ酸レベルで約80%,40%の相同性を有していることが判明した。また、クローニングされたHHT遺伝子を大腸菌で発現させたところ、粗抽出タンパク質中に有意なHHT活性が検出された。

Early recognition of disease resistance development in the past year-resistant genes-reference for conservation areas in reported diseases, PCR amplification The goal of the game is to win the game. The key enzymes CCoAOMT and HHT were successfully synthesized in the synthesis of Avenanthramide. CCoAOMT gene is used to generate DNA, HHT gene is used to generate DNA. The former is alfalfa,parsley and CCoAOMT gene, while the latter is carnation and HCBT gene. About 80% and 40% of them are identical. HHT gene was detected in E. coli, and HHT activity was detected in crude extract.