ネコスプーマウイレルスを用いた遺伝子導入用ベクター開発の基礎研究

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ネコスプーマウイルス(FSV)はレトロウイルス科スプーマウイルス属に属するウイルスで、ネコにおいて病原性はないと考えられている。本研究の目的はFSVのベクター化による、家畜への安全な遺伝子導入法の確立のための基礎研究を行うもので、本年度は最終年度で、成果の概要は以下の通りである。1.ネコ腎由来株化細胞であるCRFK細胞にFSVを感染させ、感染後48時間後に染色体DNAを回収した。すでに報告されているFSVの塩基配列に基づきプライマーをデザインし、FSVのgag領域、pol領域、env領域をPCRにて増殖、pMosBlueTベクターにクローニングした。さらに塩基配列をDye Terminateor法、ABI PRISM377DNAシークエンサーを用いて決定し、FSVの部分DNAであることが確認された。2.CRFK細胞におけるFSVのGag、PolおよびEnvタンパクの発現はRSVLTRに制御されていることを明らかにした。3.バキュロウイルス発現系を用いて、Gag発現トランスファーベクター、Pol発現トランスファー4.ベクターおよびEnv発現トランスファーベクターの作製を行った。5.発現トランスファーベクターをSf9およびHi5細胞にトランスフェクトさせて、感染性を確認した。5.それぞれのタンパクに対するモノクローナル抗体が作製され、FSV遺伝子型および血清型の解析が可能になった。