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植物マイコプラズマの病原性の分子機構

植物支原体致病性的分子机制

基本信息

批准号：
00J08324
负责人：
澤柳利実
金额：
$ 2.05万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J08324/
关键词：
ファイトプラズマタマネギ萎黄病病徴変異株 PFGE

项目摘要

本年度は、昨年度に引き続きタマネギ萎黄病ファイトプラズマ(onion yellows phytoplasma; OY)のゲノム遺伝子の解析を行った。OY-ファイトプラズマは野生株(OY-W)と継代保存中に病微の変異した弱毒変異株(OY-M)を維持している。昨年度まではOY-Wのゲノム遺伝子の解析がほとんどであったが、今年度はOY-Mのゲノム遺伝子の解析も大幅に進行した。感染植物からゲノムDNAを抽出しPFGEによりゲノムサイズを比較したところ、OY-Mが約10000kbpであるのに対しOY-Mは約870kbpであった。約130kbpのゲノムサイズの異なる領域には、病徴に変異を起こす、病徴決定因子が存在することが予想される。OY-Wの解析で昨年度に引き続きライブラリからのスクリーニングによるゲノムウォーキングを中心に行ったが、OY-Mの遺伝子解析ではOY-Wの塩基配列データに基づきPCRプライマーを設計し、LA-PCR増幅断片のショットガンシークエンスを行っている。また、免疫組織化学手法により、OY-W感染植物ではOY-M感染植物と比較し篩部における個体数が多く、篩部増生やカロースの沈着も多く認められたことから、これらの違いが病微との違いになっている可能性が示唆された。OY-Wゲノムよりタンパク質膜輸送系の1つであるSec systemの必須構成因子secA、及びsecy遺伝子クローニングした。SecAタンパク質を大腸菌において大量発現,精製し、抗SecAポリクローナル抗体を作出した。抗体を用いたウェスタンブロットと組織内免疫染色の結果、OY-W感染植物内でSecAが発現されていることが確信された。これらの結果は、OY-WにおけるSec Systemの存在を強く示唆する。ファイトプラズマは細胞壁を持たず、宿主細胞質内に寄生することから、その膜外分泌系は宿主-病原相互作用に重要な役割を果たしていると考えられた。

This year's phytoplasma; last year's chlorosis disease chlorosis (onion yellows phytoplasma; OY) analysed The OY-ファイトプラズマは wild strain (OY-W) and the weakly virulent strain (OY-M) are currently being preserved and maintained. Yesterday's OY-W のゲノム伝子のanalytical がほとんどであったが, this year's はOY-M のゲノム伝子のanalytical に大した. Infected plant DNA extraction, PFGE extraction, comparison, OY-Mがabout 10000kbpであるのに対しOY-Mはabout 870kbpであった. Approximately 130kbp のゲノムサイズのdifferent なる domain には, disease 徴に変different をrise こす, disease 徴determinant factor がexistent することが yu think される. Analysis of OY-Wグによるゲノムウォーキングをcenterに行ったが、OY-Mの伝子解Analysis of the design of the OY-W base arrangement and PCR design , LA-PCR amplification fragment のショットガンシークエンスを行っている.また, immunohistochemistry technique により, OY-W infected plants では OY-M infected plants と comparison しsieve part における number of individuals が多く, sieve part生やカロースの正も多くcognizeめられたことから、これらのviolation いがDisease microとのviolation いになっているpossibility がshows instigation された. The OY-W ゲノムよりタンパク plasma membrane transport system の1つであるSec system の must constitute the factor secA, and the びsecy缝子クローニングした. SecA タンパク-quality coliform bacteria are found in large quantities and refined, and anti-SecA ポリクローナル antibodies are produced. The results of immunostaining in the tissue using the antibody and the detection of SecA in the OY-W-infected plants were confirmed.これらのRESULTは、OY-WにおけるSec Systemの EXISTENCE を强くshows instigationする.ファイトプラズマは Cell wall をたず, にparasitism することから, その in the host cytoplasm The extramembranous secretion system is important for host-pathogen interactions and is of great importance in the host-pathogen interaction.