权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

高等植物におけるペルオキシソーム形成機構の遺伝学的、細胞生物学的解析

高等植物过氧化物酶体形成机制的遗传和细胞生物学分析

基本信息

批准号：
00J11016
负责人：
深尾陽一朗
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The Graduate University for Advanced Studies
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

脂肪性種子植物の子葉に存在するペルオキシソームは、その成長過程において可逆的に機能転換することが知られているオルガネラである。暗所で生育させた黄化子葉には脂肪酸β酸化やグリオキシル酸回路に関与するグリオキシソームが存在する。やがて光を受けて緑化した子葉では光呼吸に関与する緑葉ペルオキシソームへと機能転換する。近年決定されたシロイヌナズナゲノム配列を検索すると、ペルオキシソーム輸送シグナルであるPTS1やPTS2を持つ遺伝子、あるいはペルオキシソームの機能に関与する遺伝子が281存在していることが明らかとなった。このことは、ペルオキシソームに未同定タンパク質が数多く存在していることを示唆する。そこで本研究では、MALDI/TOF-MSを用いたプロテオーム解析によりペルオキシソームに局在するタンパク質を網羅的に解析することで、新規タンパク質の同定を行うこととした。すでにシロイヌナズナからの緑葉ペルオキシソーム単離系を確立し、19の新規タンパク質を含む29のタンパク質を同定することに成功している。これを黄化子葉に存在するグリオキシソームへと解析対象を移し、同じくプロテオーム解析を行った。この結果、13の新規タンパク質を含む19のタンパク質を同定した。このようなオルガネラに特化したプロテオーム解析において、同定された新規タンパク質が実際そのオルガネラに局在するかどうかを解析することは、その実験の精度を証明する上でも非常に重要なポイントとなる。そこで新規に同定されたタンパク質の1つをperoxisomal protein kinase1(PPK1)と命名し、さらに詳細な解析を行った。解析の結果、PPK1はグリオキシソーム膜の内側に存在する表在性型膜タンパク質であり、kinase domainと予想される領域がグリオキシソーム内に存在していることを明らかになった。これまで、全生物種のペルオキシソームにおいて、ペルオキシソーム内でのリン酸化が起こるかどうかは知られていなかった。このことから、カボチャ黄化子葉からの単離グリオキシソームを用いて、グリオキシソームタンパク質がアイソトープラベルされるかを確認したところ、確かにグリオキシソームタンパク質がリン酸化を受けることを明らかにした。さらに、PPK1が約40kDaタンパク質に対して特異的にリン酸化を行っていることが示唆された。

The cotyledons of fatty seed plants exist in a variety of ways, and the growth process is reversible. The presence of fatty acid beta acidification in the yellow cotyledons The green leaves are sensitive to light, and the cotyledons are sensitive to light. In recent years, it has been decided that there are 281 types of transmission channels in the PTS1 and PTS2, which are related to the function of the transmission channel. The number of different types of products is different, and the number of products is different. In this study, MALDI/TOF-MS was used to analyze the quality of the product. The system was successfully established, 19 of which were new, including 29 of which were identical. This is the first time that a plant has been identified. The result is that the quality of the 13 new items is the same as that of the 19 new items. This is a very important part of the process of specialization and analysis. The new regulation is based on the same definition of peroxisomal protein kinase1(PPK1). The results of the analysis show that PPK1 has a high molecular weight and a low molecular weight. This is the first time that the whole species has been selected and acidified. This is the first time that the Chinese government has made a decision on the implementation of the "Three Represents" policy. PPK1 is about 40kDa in size, and it can be used for specific protein reactions.