癌遺伝子Mycの分解制御による癌化機序の解明

通过调节癌基因Myc的降解阐明癌变机制

• 批准号: 00J60702
• 负责人: 服部 公彦
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nagoya University (2002)Kyushu University (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J60702/
• 关键词: ユビキチン化

我々は、癌化におけるタンパク分解システムの役割を明らかにする目的で、2倍体生物であるために、従来は劣勢変異体を得ることが困難であった哺乳動物細胞株において、Ribozymeおよびvector型RNAiを用いて、効率的な標的遺伝子破壊を行う新しい遺伝学的解析方法を試みた。まず、CDKインヒビターであるP27^<Kip1>のユビキチン依存性分解にかかわるSkp2を標的とするRibozymeおよびRNAi vectorを設計し、p27^<Kip1>の分解およびSkp2の発現量に与える影響を調べた。RibozymeまたはRNAi vectorを導入した細胞では、導入していない細胞と同様にG_0-G_1移行期にp27^<Kip1>は速やかに分解されたが、S-G_2期にかけて正常では認められないp27^<Kip1>の蓄積が認められた。これはSkp2ノックアウトマウスで認められるp27^<Kip1>の量的変動の仕方と全く同一であった。次に、ミトコンドリア局在タンパク質を標的としたRNAi vectorを作成し、その発現量に与える影響を調べた。RNAi vector導入細胞では、非導入細胞に比べて、ミトコンドリア局在タンパク質の発現量が著明に減少していることが、細胞の免疫染色およびウェスタンブロット法によって明らかになった。また、この効果は、合成型RNAiとほぼ同等であった。以上のことから、vector型RNAiは合成型RNAiと同様の遺伝子破壊効果があり、細胞レベルでの効率的な遺伝子破壊を可能にする強力な手段であることが示唆された。今後、Ribozymeまたはvector型RNAiを用いたランダムな遺伝子破壊によって、細胞の増殖シグナル伝達機構の網羅的な解明につながることが期待される。

I 々 は, canceration に お け る タ ン パ ク decomposition シ ス テ ム の "を cut Ming ら か に す で る purpose, 2 times the body biological で あ る た め に, 従 to は disadvantage - foreign を る こ と が difficult で あ っ た mammalian cell lines に お い て, Ribozyme お よ び RNAi vector type を with い な mark of て, sharper rate 伝 son broken 壊 う new を line The analytical method of 伝 studies を try みた. ま ず, CDK イ ン ヒ ビ タ ー で あ る P27 ^ < Kip1 > の ユ ビ キ チ ン dependency decomposition に か か わ る Skp2 を mark と す る Ribozyme お よ び RNAi vector を design し, P27 ^ < Kip1 > の decomposition お よ び Skp2 の 発 quantity に and え る influence を adjustable べ た. Ribozyme ま た は RNAi vector を import し た cells で は, import し て い な と い cells with others に G_0 - G_1 phase transition に p27 ^ < Kip1 > は speed や か に decomposition さ れ た が, S - phase G_2 に か け て normal で は recognize め ら れ な い p27 ^ < Kip1 > の accumulation が recognize め ら れ た. こ れ は Skp2 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス で recognize め ら れ る p27 ^ < Kip1 > の quantity - move の shi と く all same で あ っ た. に, ミ ト コ ン ド リ ア bureau in タ ン パ ク qualitative を mark と し た RNAi vector を し, consummate そ の 発 quantity に and え る influence を adjustable べ た. RNAi vector import cell で は, the import cell に than べ て, ミ ト コ ン ド リ ア bureau in タ ン パ ク qualitative の 発 now decrease が zhao Ming に し て い る こ と の が, cell immune dyeing お よ び ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト method に よ っ て Ming ら か に な っ た. The effects of また, and <s:1> are the same as those of the synthetic RNAiとほぼ. Above の こ と か ら, vector RNAi は synthetic RNAi と with others の heritage 伝 son broken 壊 unseen fruit が あ り, cell レ ベ ル で の な of unseen rate 伝 son broken 壊 を may に す る powerful な means で あ る こ と が in stopping さ れ た. In the future, Ribozyme ま た は RNAi vector type を with い た ラ ン ダ ム な heritage 伝 son broken 壊 に よ っ て, cell の raised colonization シ グ ナ ル 伝 reach agency の snare な interpret に つ な が る こ と が expect さ れ る.