Development of a fluorezence based testsystem to investigate the mechanism of activation of G protein-coupled receptors

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Im Rahmen der Förderung dieses Antrags soll ein System entwickelt werden, mit dessen Hilfe sich Konformationsänderungen von G-Protein-gekoppelten Rezeptoren messen lassen, die durch Liganden induziert werden. Dazu sollen zunächst zwei Fluorophore durch molekularbiologische Techniken an geeigneten Stellen in den Rezeptor eingebracht werden. Durch zweckmäßige Auswahl der Fluorophore kann dabei einer der beiden Fluorophore durch die Emission des anderen angeregt werden. Bedingt durch eine Konformationsänderung des Rezeptors während der Aktivierung durch einen Agonisten soll es zu einer Distanzänderung zwischen beiden Fluorophoren kommen, so dass zwischen ihnen ein Fluoreszenzresonanzenergietransfer stattfinden kann, der als Signal gemessen werden kann. Die Vorteile dieses Systems gegenüber bisherigen Techniken wären die Anwendung in lebenden Zellen und bedingt durch die Verwendung eines kleinen Fluorophors als Bewegungssensor sollte zudem die Erfassung schneller Aktivierungskinetiken möglich werden.