ディファレンシャルディスプレイ法による血管疾患の疾患関連遺伝子の探索

利用差异显示法寻找血管疾病的疾病相关基因

• 批准号: 12877198
• 负责人: 安田 慶秀
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877198/
• 关键词: 静脈瘤; ティファレンシャル・ディスプレイ; サイトカイン; ディファレンシャル・ディスプレイ

下肢静脈瘤の手術で採取した静脈瘤は17検体、大動脈-冠動脈バイパス術時に採取された正常静脈は5検体得られた。液体窒素で凍結し、-70℃の冷凍庫で保存した。標本を細かく砕いてホモジェナイザーですりつぶし、total RNAを抽出した(RN easy Kit,QIAGEN)。下肢静脈瘤患者の静脈では、浸潤してきたマクロファージがIL-6等のサイトカインを放出していると報告されている。IL-6、OSM、LIF、TGF-β1の4種類のプライマーでcDNAを合成し、PCRを行った。PCR産物を2.5%アガロース・ゲルで電気泳動し、エチジウムブロマイド(EtBr)で染色した。OSMは初めに作ったプライマーでは、どの検体でも発現が認められなかったため、シークエンスを変えて作り直した。IL-6の発現が認められた検体ではLIFも発現していることが多かった。また、正常静脈でも1検体でIL-6,LIFが発現していた。RNAの発現が明らかに認められた静脈瘤4検体のプール、発現の認められなかった静脈瘤4検体のプール、およびこれらの発現が認められなかった正常静脈4検体のプールから純度の高いRNAを抽出した。これらをマイクロアレイ法に提出した。この3つの群でどのような遺伝子が異なっているのかが明らかにされる予定である。今後は、違いの認められた遺伝子がcodeしているRNAそれぞれについて検討していく予定である。

17 cases of venous aneurysm were taken during operation, and 5 cases of normal venous aneurysm were taken during operation. The liquid is frozen and stored in a freezer at-70℃. Total RNA Extraction Kit (RN easy Kit,QIAGEN) Reports on the release of IL-6 and other support services in the veins of patients with venous aneurysms of the lower extremities have been prepared. The cDNA of IL-6, OSM, LIF and TGF-β1 was synthesized and PCR was performed. PCR products were 2.5% pure and stained with EtBr OSM is the first to make a name for itself. IL-6 was found to be in the middle of a large number of cases. IL-6 and LIF were found in normal vein cells. The RNA was extracted from the normal vein by high purity RNA extraction. This is the first time that I've ever seen a woman. The three groups are divided into different groups. In the future, we will not be able to identify the source code of the RNA.