幹細胞の自己複製機構の解明

阐明干细胞的自我更新机制

• 批准号: 01J00600
• 负责人: 増原 正明
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J00600/
• 关键词: 幹細胞; MDM2; p53; 核外移行; PGC7; MDM2-p53; 核膜

1,これまでの研究によって、mgcl-1 (mouse germ cell-less-1)遺伝子産物は始原生殖細胞や精子形成に大きな役割を果たしていること、また核膜に局在しており核構造の維持に関与していることが判明している。mGCL-1の機能を解析するためにyeast two hybridスクリーニングを行った結果、tumor susceptibility gene 101 (TSG101)がmGCL-1と結合することが見いだされた。この両者はin vitroおよびin vivoにおいても結合することが確認された。これまでの報告でTSG101はユビキチン化阻害によってMDM2の量を増大させることが知られているので、mGCL-1がMDM2-p53経路に及ぼす影響を調べた。その結果mGCL-1はMDM2の細胞内局在を核から細胞質へと大きく変化させることにより、MDM2の分解を促進することが判明した。さらに培養細胞にmGCL-1を遺伝子導入するとp53の蛋白質量、転写活性化能とも増大していることが明らかとなった。このようにmGCL-1が核膜においてMDM2の核外移行を行うことによって、MDM2-p53経路を制御していることを明らかとした。これらの結果をまとめて下記論文を発表した。2,これまでにSAGE法によって胚性幹細胞と始原生殖細胞で発現が異なる遺伝子を調べ、始原生殖細胞でのみ高い発現が見られる遺伝子、PGC7をクローニングした。この分子は始原生殖細胞の分化に大きな役割を果たしていることが分かっているが、その機構については全く分かっていない。PGC7の機能解析を行うためにtandem affinity purification (TAP)法を用いてPGC7と結合する分子のスクリーニングを行った。その結果、核移行に関与する分子Ran binding protein 5 (RAN-BP5)がPGC7と非常に強く結合することが判明し、この結果は培養細胞を用いたin vivo binding法でも確認された。現在PGC7の核内への移行、および局在変化がどのような作用を引き起こすか、についてさらに解析を進めている。

1, こ れ ま で の research に よ っ て, MGCL - 1 (mouse germ cell - less - 1) heritage 伝 zi chan content は primordial germ cells in the beginning や spermatogenesis に big き な "を cut fruit た し て い る こ と, ま た nuclear membrane に bureau in し て お り nuclear structure の maintain に masato and し て い る こ と が.at し て い る. Function of mGCL - 1 の を parsing す る た め に yeast two hybrid ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た results, tumor susceptibility gene 101 (TSG101) が と mGCL - 1 combined す る こ と が see い だ さ れ た. The <s:1> <s:1> two て in vitroおよびin vivoにお て て する in combination with する とが とが confirm された. こ れ ま で の report で TSG101 は ユ ビ キ チ ン chemical resistance against に よ っ て MDM2 を raised large amount of の さ せ る こ と が know ら れ て い る の で, mGCL - 1 が MDM2 - p53 に 経 road and ぼ す influence を adjustable べ た. そ の results mGCL - 1 は MDM2 の cells inside bureau in を nuclear か ら cytoplasm へ と big き く variations change さ せ る こ と に よ り, MDM2 の decomposition を promote す る こ と が.at し た. さ ら に culture cell に mGCL - 1 を heritage 伝 son import す る と p53 の protein quality, planning can write activeness と も raised large し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. こ の よ う に が mGCL - 1 nuclear membrane に お い て MDM2 の nucleus transitional line を う こ と に よ っ て, MDM2 - p53 経 road を suppression し て い る こ と を Ming ら か と し た. The results are をまとめて and the following is the paper を. 2, こ れ ま で に SAGE method に よ っ て embryonic stem cells と beginning primordial germ cells で 発 different showing が な る heritage 伝 を べ, beginning primordial germ cells で の み high い 発 が now see ら れ る heritage 伝, PGC7 を ク ロ ー ニ ン グ し た. Beginning こ の molecular は primordial germ cells の に big き な "を cut fruit た し て い る こ と が points か っ て い る が, そ の institutions に つ い て は く points か っ て い な い. PGC7 の line function analytical を う た め に tandem affinity purification (TAP) method を with い て PGC7 と combining す る molecular の ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. そ の results, nuclear migration に masato and す る molecular Ran binding protein 5 (Ran - BP5) が PGC7 と very strong に く combining す る こ と が.at し, こ の results は culture cell を with い た the in vivo binding method で も confirm さ れ た. Now PGC7 の intranuclear へ の migration, お よ び bureau in - が ど の よ う な function を lead き こ す か, に つ い て さ ら に parsing を into め て い る.

项目成果

Kitajima K. et al.: "GATA-2 and GATA-2/ER display opposing activities in the development and differentiation of blood progenitors"EMBO J.. 21(12). 3060-3069 (2002)

Kitajima K. 等人：“GATA-2 和 GATA-2/ER 在血液祖细胞的发育和分化中表现出相反的活性”EMBO J.. 21(12)。

Masuhara M., et al.: "Enhanced degradation of MDM2 by a nuclear envelope component, mouse germ cell-less."Biochem.Biophys.Res.Comm.. 308(4). 927-932 (2003)

Masuhara M. 等人：“无小鼠生殖细胞的核膜成分增强了 MDM2 的降解。”Biochem.Biophys.Res.Comm.. 308(4)。

Sato M et al.: "Identification of PGC7, a new gene expressed specifically in preimplantation embryos and germ cells"Mechanisms of Development. 113(1). 91-94 (2002)

Sato M 等人：“PGC7 的鉴定，一种在植入前胚胎和生殖细胞中特异性表达的新基因”发育机制。