新規カルシウム結合蛋白質peflinの性状解析と生理機能の解明

新型钙结合蛋白peflin的表征及生理功能

• 批准号: 01J01658
• 负责人: 北浦 靖之
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J01658/
• 关键词: EF-ハンド; カルシウム; ダイマー形成; アネキシン; 相互作用; two-hybrid; モチーフ; penta-EF-hand

peflinは、5つのEF-handをもつpenta-EF-hand(PEF)カルシウム結合蛋白質であり、アポトーシス誘導に関与するカルシウム結合蛋白質ALG-2と同じファミリーに属す。peflinの特異的モノクローナル抗体を作製することにより、peflinは、アポトーシス誘導に関わるCa^<2+>結合蛋白質ALG-2とヘテロダイマーを形成すること、また、細胞内局在性解析の過程で、peflinが細胞質に存在するのに対して、ALG-2は細胞質と核にも存在することをすでに明らかにしていたが、本研究では、peflinとALG-2の相互作用部位を明らかにする目的で、各種欠損変異体を作製し、酵母two-hybrid法による解析をおこなった。その結果、peflin、ALG-2ともにEF-5を含むC末端領域が相互作用に必要であることが判明した。これは、EF-5はカルパインの結晶解析によりダイマー形成部位であることが分かっているが、このことはpeflinとALG-2のヘテロダイマー形成についても当てはまる一般的原理であると思われる。peflinの主な機能として、ALG-2とヘテロダイマーを形成することにより、ALG-2の安定性、局在性や機能を制御している可能性が考えられる。Peflinの相互作用因子探索のため酵母two-hybrid法によるスクリーニングを行ったが、ALG-2が陽性クローンとして得られたが、他のクローンは、擬陽性と判断された。一方、ALG-2の相互作用因子を探索した結果、peflinとともに、Alixが陽性クローンとして得られた。さらに新規相互作用因子としてアネキシンXIが見出された。欠損変異体解析よりアネキシンXIのN末端領域と結合すること、in vitroでの解析によりカルシウム依存的に結合することが明らかになった。また、アネキシンXIのN末端領域とAlixのC末端領域はアミノ酸配列に類似が見られ、共通の結合モチーフを有していることが推察された。

peflin 5 EF-hand penta-EF-hand(PEF) ALG-2 Peflin specific antibody production process, peflin, protein induction, Ca^<2+> binding protein ALG-2, protein formation, intracellular localization analysis process, peflin, cytoplasmic existence, ALG-2, cytoplasmic existence, this study The interaction site of peflin and ALG-2 was analyzed by the yeast two-hybrid method. The results of the interaction between peflin, ALG-2 and EF-5, including the C-terminal domain, were identified. The crystal analysis of EF-5 and ALG-2 is based on the general principle of crystal formation. The main function of peflin, ALG-2 and the possibility of formation, stability and local function control of ALG-2 are examined. During the yeast two-hybrid method for the exploration of Peflin's interacting factors, ALG-2 was found to be positive, and other genes were found to be pseudo-positive. The interaction factor of ALG-2 was explored. The results showed that peflin and Alix were positive. The new interaction factor was found to be a factor in the evolution of the system. The N-terminal domain of the missing variant is combined with the N-terminal domain of the missing variant. The N-terminal region of the gene sequence XI and the C-terminal region of the gene sequence X are similar to each other in terms of gene sequence and gene sequence.

项目成果

M.Maki 他4名: "Structures, functions and molecular evolution of the penta-EF-hand Ca^<2+-> binding proteins"Biochimica et Biophysica Acta. 1600. 51-60 (2002)

M. Maki 和其他 4 人：“五-EF-手 Ca^<2+-> 结合蛋白的结构、功能和分子进化”Biochimica et Biophysicala Acta. 1600. 51-60 (2002)

Y.Kitaura 他4名: "Both ALG-2 and peflin, penta-EF-hand (PEF) proteins, are stabilized by dimer-ization through their fifth EF-hand regions"Archives of Biochemistry and Biophysics. 399. 12-18 (2002)

Y.Kitaura 和其他 4 人：“ALG-2 和 peflin、penta-EF-hand (PEF) 蛋白均通过其第五个 EF-hand 区域的二聚化来稳定”《生物化学与生物物理学档案》399. 12-18。 (2002)

H.Satoh 他4名: "ALG-2 Interacts with the amino-terminal domain of annexin XI in a Ca^<2+-> dependent manner"Biochemical and Biophysical Research Communications. 291. 1166-1172 (2002)

H. Satoh 和其他 4 人：“ALG-2 以 Ca ^ 2+- 依赖性方式与膜联蛋白 XI 的氨基末端结构域相互作用”，生物化学和生物物理研究通讯。 291. 1166-1172 (2002)