タバコモザイクウィルスの増殖をサポートするシロイヌナズナTOM宿主因子の機能解析

支持烟草花叶病毒生长的拟南芥TOM宿主因子的功能分析

• 批准号: 01J10862
• 负责人: 萩原 優香
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J10862/
• 关键词: 植物ウイルス; 宿主因子; 複製複合体; 細胞内局在性; 膜タンパク質

タバコモザイクウイルス(TMV)の増殖に関与するシロイヌナズナTOM因子(TOM1,TOM2,TOM3)は,アミノ酸配列よりどれも膜タンパク質であることが予測される.これらTOM因子が,植物細胞内のどのオルガネラ膜に存在するかを調べるために,TOM因子とGFPとの融合タンパク質を恒常的に発現する形質転換BY-2(タバコ培養細胞)を作製し,共焦点レーザースキャン顕微鏡で解析した.その結果,TOM1とTOM2は主に液胞膜に局在していた.TOM3は,ゴルジ体あるいは液胞膜に局在する可能性が示された.さらに,イオディキサノール密度勾配遠心法によりオルガネラ膜を分画し,特異的抗体で分析した結果,TOM2は液胞膜画分に検出された.TOM1は,液胞膜画分に最も多く検出され,また小胞体やゴルジ体など様々な膜が混在する画分にも検出されたことから,液胞膜以外の膜にも局在する可能性が示された.TOM3については使用可能な抗体が得られておらず,現在抗体作製中である.TMVゲノムRNAの複製に関わるウイルスタンパク質とTOM因子との共局在性について調べるため,TMV感染細胞を用いた解析を行った.その結果,膜タンパク質でないと考えられるTMV複製タンパク質は,可溶性タンパク質を多く含む可溶性画分に最も多く検出されたが,膜画分にも存在した.膜画分内における分画パターンはTOM1とよく似ていた.さらに,各画分に含まれるTMV RNA合成活性について調べた結果,TOM1が多く含まれる画分には,高いTMV RNA合成活性が見られることが明らかとなった.可溶性画分には複製タンパク質が多く含まれるにもかかわらず,活性は検出されなかった.以上より,少なくともTOM1は,TMV RNA複製複合体の構成因子の一つとして,液胞膜および未同定の膜上に複製複合体をつなぎ止める役割を果たしている可能性が強く示唆された.

The TOM factor (TOM1,TOM2,TOM3) is different from that of the control group (TMV). The concentration of acid is different from that of the membrane. The TOM factor, the intracellular membrane of the plant, the cell membrane of the plant, the GFP factor, the fusion factor, the constant factor, the BY-2 (cell culture), the confocal point, the cell, the cell. The results showed that the plasma membrane of the main body of TOM1 TOM2 was located in the plasma membrane of the host. TOM3, and the plasma membrane of the host cell showed a significant difference in the possibility. The results of specific antibody analysis, TOM2 liquid cell membrane drawing, liquid cell membrane drawing, small cell body, cell body, cell membrane, and so on. In addition to the plasma membrane, the possibility of the use of antibodies in the plasma membrane shows that it is possible to use antibodies. TMV, RNA, copy, copy, The results showed that the results showed that there were significant differences in the results of TMV replication test, multi-factor analysis, multi-factor analysis, and the existence of membrane painting. The film painting is divided into two parts: the film painting, the TOM1 painting, the film painting. The results of each picture show that the activity of TMV RNA synthesis is different, that of TOM1 is more than that of TMV RNA, and that the activity of TMV RNA synthesis is higher. The soluble picture is divided into two parts: the soluble picture is divided into several parts, the soluble picture is divided into several parts, the soluble picture is divided into several parts, the soluble picture is divided into two parts. In the above, there is no need for TOM1, TMV RNA replication is a factor, and the cytoplasmic membrane is not identical. The possibility of cutting the fruit is strongly indicated.

项目成果

萩原優香(Yuka Hagiwara): "Subcellular Localization of Host and Viral Proteins Associated with Tabamovirus RNA Replication"The EMBO Journal. 22・2. 344-353 (2003)

Yuka Hagiwara：“与 Tabamovirus RNA 复制相关的宿主和病毒蛋白的亚细胞定位”EMBO 杂志 22・2（2003）。