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2-デオキシ-scyllo-イノソース合成酵素の動的解析及びその応用

2-脱氧青蟹肌糖合酶的动态分析及其应用

基本信息

批准号：
01J11520
负责人：
中西恵理子 (南後恵理子)
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J11520/
关键词：
天然物化学阻害剤 X線液晶解析酵素生合成

项目摘要

2-デオキシ-scyllo-イノソース(DOI)合成酵素は、2-デオキシストレプタミン(DOS)含有型アミノ配糖体抗生物質ブチロシンの生合成鍵酵素で、グルコース-6-リン酸を直接炭素六員環化することによりDOIを生成する。DOIは2,3,4,5-テトラヒドロキシシクロヘキサノン構造を有し、構造的に脱水して芳香環化しやすい化合物であることから、医薬品や香料の原料となるカテコールなどの芳香族化合物に一工程で変換可能である。このように本酵素は応用性の高い酵素として興味深いが、いまだその三次元構造や詳細な反応機構は明らかとなっていない。そこで、本酵素の三次元構造を明らかとするためのX線結晶解析に着手した。250種類のスクリーニングの結果、PEGを用いた系で結晶化することがわかり、この結晶のX線回折測定より、2.3Åの分解能のデータを得ることができた。次に位相を決めるため、分子置換法、セレノメチオニン置換体による他波長異常分散法を検討したが、いずれも決定には至らなかった。続いて、各種重原子試薬を用い、結晶に重原子を導入したところ、水銀、白金による重原子置換体の回折を得ることができ、重原子置換法から位相決定することに成功した。現在モデルビルディング及び構造精密化を行なって、活性部位などのアミノ酸残基の解明に努めている。次に反応機構解析を行なうため、基質類縁体carbaglucose-6-phosphate(C-6-P)の重水素標識体を合成した。この標識体と本酵素の反応を^2H-NMRにて追跡したところ、新たなシグナルが観測された。現在この生成物の単離を行なっており、重水素の位置から反応機構に関する知見を得ようと考えている。

2-carboxylic acid (DOI) synthetic enzyme (DOI), 2-carboxylic acid (DOS) containing antibioglycans, antibioglycans, biosynthetic enzymes, 6-carboxylic acid-6-carboxylic acid, direct carbon, DOI. DOI, dehydration, aromatic, environmental, chemical, chemical, and so on. This enzyme has high sex, the enzyme has a deep taste, and the three-dimensional reaction mechanism has been made clear that the anti-mechanism is sensitive. This enzyme is used to analyze the X-ray analysis of the X-ray spectrum of this enzyme. The results of the experiments show that the temperature of the PEG is higher than that of the other two, and the temperature is determined by X-ray back-analysis of the X-ray of the crystallization of the temperature. The secondary phase is determined by the molecular method, the molecular method, the wave length constant dispersion method, and the temperature is determined by the molecular method, the phase method, the molecular method, the wave length constant dispersion method. The weight of the heavy atom, the weight of each heavy atom, the weight of the heavy atom, the heavy atom. Now, in order to improve the precision and precision of the process, the active parts are sensitive to acid residues. The secondary anti-drug agency analyzes the synthesis of heavy water compounds in the system of basic and basic carbaglucose-6-phosphate (Cmur6murp). This enzyme reacts to ^ 2H-NMR to catch up with the baby, and the new one is the best. At present, the product product is located in the production line, and the heavy water content is in the position of the anti-drug agency.