酵母RINGタンパク質ファミリーの網羅的機能・相互作用解析

酵母RING蛋白家族的综合功能和相互作用分析

• 批准号: 01J60071
• 负责人: 小柳 智義
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J60071/
• 关键词: プロテオーム; タンパク質複合体; タンパク質装飾; ユビキチン

多くの生物種でゲノム解析が終了あるいは進行している現在、機能未知遺伝子の機能を探ることが、ポストゲノムと呼ばれる研究で重要なポイントとである。本研究においては、これらの研究を可能にする為の質量分析法を応用した蛋白質間相互作用解析システムの確立と、ユビキチン化により修飾を受けるタンパク質とその修飾系酵素群の複合体を網羅的に同定するための、試料調製法の確立を試みた。後者の目的のために、ユビキチン遺伝子に単離と検出の為のタグを入れ、酵母細胞あるいは、動物細胞においてタグ付きのユビキチンを発現される系を構築した。1種類のタグ、例えばヒスタグのみを導入したユビキチンでは、ユビキチン化されたタンパク質のみを単離することは難しく、得られた試料のタンパク質染色のパターンとユビキチンタグに対する抗体染色では、ユビキチン化されていないタンパク質がまだ大部分であることが分かった。数種類のタグを検討した結果から、1種類のタグでは、ユビキチン化されるタンパク質を高純度に精製することが困難であることがわかった。そのために、FLAGタグやその他のタグとヒスタグの2種類のタグをタンデムに組み合わせたタグを設計し、動物細胞に安定して発現する系の構築を試みた。その結果、安定してタグ付きユビキチンを発現している株を数種類獲得し、それらからユビキチン化されたタンパク質を単離することに成功した。現在、これらのタンパク質の同定を行っている。

Many biological species have been analyzed, and their functions have been unknown. In this study, the identification of protein-protein interaction by mass spectrometry and the identification of protein-protein interaction by sample preparation were studied. The latter aims to construct a system for the development of yeast cells, animal cells, and other organisms. 1. For example, if a sample is stained with an antibody, the sample is stained with an antibody. A number of species are examined and the results are as follows: The design of two kinds of animal cells and the construction of stable animal cells were studied. The result is stable and the quality is stable. Now, we're going to have to go through the same process.