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両生類性転換過程における性ホルモン感受細胞の組織学的・分子生物学的解析

两栖动物性别转变过程中性激素敏感细胞的组织学和分子生物学分析

基本信息

批准号：
13027257
负责人：
高瀬稔
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

内分泌攪乱化学物質の毒性メカニズムの解明を目的として、性ホルモンにより誘導される両生類の性転換現象の解析を行った。材料には雄へも雌へも性転換するツチガエルの広島集団を用いた。まず、性ホルモン作用の臨界点を解析したところ、男性ホルモン(アンドロゲン)による雌から雄への性転換は、ステージXXV〜変態後1.5ケ月、0.001〜0.01μg、2〜4日間処理の間でそれぞれ臨界点が認められた。一方、女性ホルモン(エストロゲン)による雄から雌への性転換に関しては、ステージIII〜IV、0.265〜2.65nM、5〜10日間処理の間でそれぞれ臨界点が認められた。次に、性転換過程における組織変化を調べたところ、アンドロゲンでは処理後16日目に、一方、エストロゲンでは処理後4〜8日目に体細胞および生殖細胞に顕著な変化が認められた。性ホルモンは、その特異的な受容体に結合した後、遺伝子の転写活性を変化させ、様々な生理現象を引き起こすと考えられている。そこで、ツチガエルのアンドロゲン受容体およびエストロゲン受容体のcDNAを単離し、性転換過程における受容体遺伝子発現の変化をRT-PCR法により調べた。その結果、性転換過程における遺伝子発現レベルに顕著な変化は認められなかった。また、性転換が誘導されない発生時期においても受容体遺伝子の発現が認められることから、受容体以降の性ホルモン作用機序も重要であると考えた。そこで、デイファレンシャル・ディスプレイ法およびin situハイブリダイゼーション法を用いて、性転換過程において発現パターンが変化する遺伝子を網羅的に解析した。現在、アンドロゲン作用については221個の遺伝子について、またエストロゲン作用については15個の遺伝子について解析を終えている。今後、さらに多くの遺伝子について解析を行い、将来はマイクロアレー技術を用いて、内分泌攪乱化学物質の毒性メカニズムの解析を行う予定である。

The analysis of the toxicity of endocrine disrupting chemicals and their effects on the sexual metabolism of endocrine disruptors. The material is male and female, and the material is female. The critical point of the action of the female and male sex hormones was analyzed. The critical point of the action of the female sex hormones was analyzed. The critical point of the action of the male sex hormones was analyzed. The critical point of the male sex hormones The critical point for male, female and male sex change was identified at day III to IV, 0.265 to 2.65 nM, 5 to 10 day intervals. In the process of sex change, the tissue changes are regulated by the hormone, and the hormone changes are recognized by the hormone 16 days after the treatment, the hormone changes by the hormone 4 ~ 8 days after the treatment. The physiological phenomena of the sex and the specificity of the receptor are caused by the change of the activity of the gene after binding to it. The cDNA of the receptor is isolated and transformed by RT-PCR. The result of the process of sexual transformation is that the child develops and changes. In addition, the mechanism of receptor function is important in the induction period and the development period of receptor gene. In the process of sexual transformation, the expression of the gene is analyzed. Now, there are 221 genes in the function, and there are 15 genes in the function. In the future, there will be more and more genetic analysis, future use of technology, endocrine disruption chemicals toxicity analysis will be determined.