ラット網膜虚血再灌流障害モデルにおける炎症関連物質NFκBの作用

炎症相关物质NFκB对大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型的影响

• 批准号: 13771019
• 负责人: 黒川 徹
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771019/
• 关键词: 網膜; 虚血-再灌流障害; NFκB; PDTC; 神経保護

1) NFκBの阻害剤であるpyrrolydine dithiocarbamate(PDTC)をラット腹腔内に虚血前日、当日、術後1週間連日投与することにより、虚血再灌流による網膜障害が抑制されたことを、再灌流後1、2,4週間目において電気生理学的検査を用いて証明した。また再灌流後4週間目でPDTCの網膜保護作用を組織学的検査でも証明し、学会(平成13年度日本眼科学会総会、2001年度ARVO年会)で発表した。2) 作製した虚血-再灌流障害網膜パラフィン切片において、抗脂質抗体を用いて免疫組織化学染色を行った。再灌流後6時間においてPDTC投与ラットとコントロールラットの間で、抗脂質抗体陽性細胞数を比較検討したところ、陽性細胞数はPDTC投与によって有意に減少した。3) 虚血-再灌流網膜によりタンパクを分離して、NFκBと複合体を形成しているIκBの虚血再灌流障害によるリン酸化をwestern blottingで確認し、その経時変化を検討した(IkBのリン酸化はNFκB活性化の指標となる)。リン酸化は、再灌流後15分ですでに始まり、再灌流後3時間でそのピークに達し、以後減少した。4) 作製した虚血-再灌流障害網膜パラフィン切片において、NFκBの発現を確認するため、免疫組織化学的検討を行った。再灌流後1,2,3時間において抗NFκB抗体陽性細胞が、神経節細胞層、内顆粒層に認められた。以上の結果から虚血-再灌流障害網膜における神経細胞死にNFκBの関与が強く示唆された。

1) NFκB inhibitor pyrrolydine Dithiocarbamate (PDTC) was administered intra-abdominalally on the day before, on the day of, and one week after surgery if there was blood deficiency. The results of reperfusion due to ischemic blood and the suppression of omental obstruction were confirmed by the examination of electrophysiology during 1, 2, and 4 weeks after reperfusion. The protective effect of PDTC on the omentum during 4 weeks after reperfusion was confirmed by histological examination and published by the Society (Japanese Ophthalmology Association Meeting in 2001 and ARVO Annual Meeting in 2001). 2) Preparation of omentum sections and anti-lipid antibody staining using immunohistochemical staining of omentum due to blood deficiency and reperfusion impairment. 6 hours after the reperfusion, PDTC was administered to the PDTC at the same time. The number of positive cells was relatively low, and the number of positive cells was intentionally reduced by the administration of PDTC. 3) Omental depletion and reperfusion, isolation of omentum, formation of NFκB complex, and formation of IκB-deficient blood reperfusion barrier, acidification of western Confirmation by blotting, and IkB acidification and NFκB activation indicator. The acidification of リン is done, starting at 15 minutes after reperfusion, starting at 3 hours after reperfusion, and decreasing after that. 4) Preparation of omental slices for blood deficiency and reperfusion impairment, confirmation of NFκB and immunohistochemistry. Anti-NFκB antibody-positive cells, neural ganglion cell layer, and inner granular layer were detected at 1, 2, and 3 days after reperfusion. The above results show that blood deficiency-reperfusion obstruction, omental cell death, and NFκB are related to strong symptoms.