グリア細胞における低レベル酸化的ストレス応答の分子機構解明

阐明胶质细胞低水平氧化应激反应的分子机制

• 批准号: 13771419
• 负责人: 三浦 ゆり
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771419/
• 关键词: 酸化的ストレス; 老化; 細胞応答; プロテオーム解析; 活性酸素; p53; グリア細胞; シグナル伝達; 過酸化水素; グルタチオン; 細胞増殖

平成14年度は、低レベル酸化的ストレスによる細胞応答を分子レベルで明らかにするため、細胞内シグナル伝達経路の解明とプロテオーム解析の両面から解析した。1.若齢ラットのグリア細胞で認められた適応応答は、ataxia-telansiectasia mutated(ATM)及びDNA-依存性プロテインキナーゼ(DNAPK)の欠損あるいは変異マウスの細胞では認められないことから、この適応応答にはATM及びDNAPKが関与していることが示唆された。そこで、これらの基質であり細胞周期の制御やアポトーシスシグナルの要であるp53に着目し、低レベル酸化ストレスによるp53のリン酸化とそれに及ぼす加齢の影響について検討した。月齢の異なるラットからグリア細胞を培養し、0.1Gyあるいは5GyのX線を照射した後、経時的にタンパクを抽出し、抗phospho-p53抗体を用いたウェスタンブロットにより解析した。その結果、5GyのX線照射により、若齢ラット及び老齢ラットのグリア細胞でp53は速やかにリン酸化され、このリン酸化には加齢の影響はほとんど認められなかった。また、0.1Gy照射によってもp53はリン酸化されることが明らかになった。2.低レベル酸化ストレスによるタンパク発現の変化を調べるため、細胞から全タンパク質を抽出し二次元電気泳動によるプロテオーム解析を行った。一次元目は固定化pH勾配等電点電気泳動、二次元目はSDS-PAGEを行い、銀染色した後、画像解析ソフト(PDQuest)を用いてディファレンシャルディスプレーを行った。タンパクの同定は、CYPRO-Rubyにより蛍光染色した後、スポットカッターを用いてゲルを切り出し、トリプシン消化後MALDI-TOF質量分析装置を用いてペプチドマスフィンガープリンティングを行い、データベースと照合した。過酸化水素1μM処理により、若齢ラットの細胞で発現が変動するスポットを見いだした。このスポットの発現増加量及び時間経過は、老齢ラットの細胞では若齢ラットの細胞と異なっていた。

In the 14th year of Pingcheng, the acidified cells answered the molecular questions, the intracellular parameters, the pathways, the analytical data, the analytical data. 1. If you don't know how to answer, ataxia-telansiectasia mutated (ATM), and DNA- dependence (DNAPK), you don't need to know that you don't know what to do, and if you don't know what to do, if you don't know how to answer, ataxia-telansiectasia mutated (DNAPK), and DNAPK, you don't know what to do. The cell cycle is controlled by the cell cycle. The target is p53, the acidification is low, the p53 is acidified, the cell is acidified, and the signal is added. Every month, the cell cultures were cultured, the 0.1Gy cells were irradiated with 5Gy X rays, and the anti-phospho-p53 antibodies were extracted from the cells after irradiation. The anti-phospho-p53 antibodies were analyzed by cell culture assay. The results of 5Gy X-ray irradiation, the rapid growth of p53 cells, the rapid acidification of p53, and the effect of X-ray irradiation on the results, X-ray radiation, X-ray radiation, and so on. 0.1Gy irradiation, p53 irradiation, acidification, acidification, acid, and so on. two。 Low-temperature electrophoretic treatment, low-temperature electrophoretic analysis, low-temperature acidification, low-temperature, low-temperature, low-temperature, The primary object immobilized pH is equipped with other electrophoretic activities, the secondary object SDS-PAGE line, after dyeing, the portrait resolution device (PDQuest) is used to analyze the image. After the light staining was done, the CYPRO-Ruby was used to determine the content of the dye, and the MALDI-TOF after digestion was used to measure the volume of the product. If the acidified water content is 1 μ M, the temperature will not be affected. If the acidified water content is 1 μ M, the temperature will be reduced. It is necessary to pay for the increase in the amount of money and the amount of time it has been overdue, and the elderly do not have to pay for the increase in the amount of money and the amount of time available.

项目成果

Miura, Y.et al.: "Adaptive Response of Glial Cells"Biol.Sci.Space. 15. 193-194 (2002)

Miura, Y.等人：“神经胶质细胞的适应性反应”Biol.Sci.Space。

Miura, Y. et al.: "Cellular mechanisms of radiation adaptive response in cultured gliai cells."ISRH proceedings. (in press). (2002)

Miura, Y. 等人：“培养的神经胶质细胞中辐射适应性反应的细胞机制。”ISRH 论文集。

三浦ゆり 他: "培養グリア細胞における放射線適応応答の分子機構"磁気共鳴と医学(大和田滋、吉川敏一編)日本医学館. 13. 143-145 (2002)

Yuri Miura 等人：《磁共振与医学》中的“培养神经胶质细胞的辐射适应性反应的分子机制”（由 Shigeru Owada 和 Toshikazu Yoshikawa 编辑），日本医学博物馆 13. 143-145 (2002)。

Miura, Y. et al.: "Cell response and gene expression due to the slight oxidative stress in cultured glial cells."I Radiat. Res.. 42. 510 (2001)

Miura, Y. 等人：“培养的神经胶质细胞中轻微氧化应激导致的细胞反应和基因表达。”I Radiat。

Miura.Y.et al.: "The adaptive response and the influence of aging : Effects of low dose irradiation on cell growth of cultured glial cells"Int.J.Radial.Biol.. 78. 913-921 (2002)

Miura.Y.等人：“适应性反应和衰老的影响：低剂量照射对培养的神经胶质细胞的细胞生长的影响”Int.J.Radial.Biol.. 78. 913-921 (2002)