Gene Gunシステムを用いた副腎皮質刺激ホルモン受容体抗体の作製

使用基因枪系统生产促肾上腺皮质激素受体抗体

• 批准号: 13877168
• 负责人: 久保 光正
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University of Education
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13877168/
• 关键词: Gene Gun; 副腎皮質刺激ホルモン受容体; 抗体; 鶏

免疫動物の鶏種はwhite leghorn chicken(ハイラインローラ)を用いた。また、鶏のmelanocyeで発現させるためのコンストラクトは、CMVプロモーターを有する一過性発現ベクターpRc/CMV2に、PCR法で得たマウス副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)受容体遺伝子の全コード領域を含むcDNAを組み込んで作製した。初回遺伝子導入は、産卵開始直後の20-22週齢の鶏に、Helios Gene Gunシステムを用いて胸部皮下に行った。即ち、前述コンストラクト100μgを1.0μ及び1.6μ金粒子50mgと混合(polyvinylpyrollidone濃度は0.05mg/ml)し、ヘリウムガス圧400psiの条件下で、ペントバルビタール麻酔下の鶏の脱毛した胸部に1回24shot(1shot当たりのDNA量は1μgで、異なる24箇所へ)を行った(1.0μ金粒子群及び1.6μ金粒子群それぞれ2羽)。初回打ち込みから2週間ごとに同様の打ち込みを行い、現在3回目が終了した。今後さらに1-2回打ち込む予定にしている。3回目以降の各回打ち込み後6、7、8日目の卵からIgYを精製する。抗体の検定は、メラノーマ細胞にGene Gunで用いたと同じACTH受容体cDNAを含むコンストラクトをリン酸カルシウム法で遺伝子導入し、ACTH受容体蛋白を一過性に発現させ、免疫染色法にて確認する予定である。その際、遺伝子導入していないメラノーマ細胞をコントロールとする。実験準備等に時間を要したため予定実験完遂まで至らなかったが、抗体が出来ている確証を得たなら、早期に抗体の性質につき種々検討をする予定である。

Immune animal species white leghorn chicken The expression of pRc/CMV2 was detected transiently by PCR, and the cDNA of ACTH receptor gene was assembled in the whole female domain. 20-22 weeks after the initial introduction of Helios Gene, the first time the egg is laid, Helios Gene is used in the subcutaneous part of the chest. That is, the above-mentioned concentration of 100μg, 1.0 μg and 1.6μ g gold particles 50mg mixed (polyvinyl pyrollidone concentration 0.05 mg/ml), under the condition of 400psi, the hair loss under the condition of single shot(1shot when the DNA amount is 1μg, different from 24 shots) is carried out (1.0μ gold particle group and 1.6μ gold particle group include 2 feathers). For the first time in two weeks, it was the same as the first time in three weeks. 1-2 times in the future. 3. The eggs were refined on the 6th, 7th and 8th day after the first round of the game. Antibody identification and identification of ACTH receptor cDNA by immunostaining In addition, the introduction of genes into the cell is also important. The preparation time is necessary, the antibody is confirmed, the early antibody is determined, and the nature of the antibody is determined.