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着床期子宮内膜に対する遺伝子導入法の確立と着床不全モデルの確立

着床期子宫内膜基因导入方法的建立及着床失败模型的建立

基本信息

批准号：
13877273
负责人：
東千尋
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13877273/
关键词：
NFkB 着床遺伝子導入 HVJリポオーム

项目摘要

1)これまで着床期にはLIF(Leukemia inhibitory factor)やIL-1、HB-EGF等のサイトカイン、細胞増殖因子やプロスタグランジン合成酵素等様々な物質の関与が指摘されてきたが、これらの相互関係はいまだ明らかではない。これらほとんどの遺伝子の上流には核内転写因子NFkBの結合部位が存在することから、我々はNFkBが着床を制御する因子であるかどうかの検討を行った。非妊娠、交配後1-7日目までのマウス子宮内でのNFkB活性の推移をゲルシフト法にて検討し、着床期である交配後4-6日目にその活性が上昇していることを確認した。また免疫染色によりその局在を確認した。今年度は2量体であるNFkBの構成を検討するため、スーパーシフト法を行う予定である。2)着床現象は生体内における一過性の現象であり、そのメカニズムの解明には一過性の遺伝子導入系の開発は有効な手段と考え、HVJリポソームを用いた一過性遺伝子導入系の開発を行った。HVJリポソームを子宮腔内に導入したマウスを交配させ、HVJリポソームが着床、妊娠維持を阻害しないことを確認した上でHVJリポソームに封入したβ-galaclosidase強制発現plasmidまたはLuciferase強制発現plasmidをマウスの子宮腔内に導入し導入遺伝子の発現部位と発現期間、発現強度について検討を行った。その結果、導入した遺伝子は子宮内膜腺上皮に局在し、導入24時間後に発現のピークをむかえ導入72時間後には発現が消失した。今年度は発現期間を延長させるための検討と、1)での結果をふまえNFkBのdominant negativeであるIkBの導入を行い、マウス生体内における着床現象への影響を検討し、着床促進や受精後の緊急避難法としての臨床的応用について検討していく予定である。

1) during the implantation period, LIF (Leukemia inhibitory factor), IL-1, HB-EGF, etc., cell growth factors, cellular factors, synthetic enzymes, and so on, were found to be sensitive to each other. We need to know that there is a problem in the combination of the NFkB factor in the nucleus, and that there is a problem in the combination of the nuclear factor and the NFkB factor. We should use the NFkB to control the factor. In non-pregnancy, 1-7 days after mating, the activity of NFkB was increased, and the activity was confirmed on 4-6 days after mating. Immunostaining was confirmed by the Bureau of Immunostaining. This year, we will measure your body weight by NFkB and make sure that you are in a position to make a decision. 2) in the body of a student, there is a problem of sex in the body, and an explanation is made that the system is introduced into the system through the study, and the HVJ system is used to guide the department to start a business program. The HVJ device was implanted into the mating device, the HVJ device was implanted, and the pregnancy maintenance device was implanted to make sure that the HVJ device was sealed with β-galaclosidase. The plasmid device Luciferase was forced to detect the delivery of the device in the cavity, and the expiration period and the strength of the device were detected. The results showed that the glandular epithelium of the endometrium was found to disappear after 72 hours after 24 hours of implantation. This year's cycle has been extended for the rest of the year. 1) results: the results show that the use of NFkB after fertilization has been greatly improved. The results show that the IkB has been introduced into the industry, and the implantation in vivo is like an impact on the body. Implantation promotes the use of emergency avoidance therapy after fertilization.