in vitro DNA複製系を用いた神経特異的複製因子の同定

使用体外 DNA 复制系统鉴定神经元特异性复制因子

• 批准号: 02J00017
• 负责人: 岩田 博司
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J00017/
• 关键词: JCウイルス; RPA; P53; Large T; replication; リン酸化

進行性多巣性白質脳症(PML)の病因ウイルスであるJCウイルス(JCV)は、ヒト脳組織特異的に複製することが示されているがその分子機構は明らかではない。本研究ではJCVの神経親和性のメカニズムをウイルスゲノムの増幅機構に着眼して解析を進めた。方法として、JCVゲノムの複製はウイルス早期タンパクであるLarge T以外は全てホスト側の複製因子を利用して行われることから、recombinant JCV Large T、S100 cell extract、JCVゲノム複製調節領域を有するplasmidを加えたin vitro JCV amplification systemを確立し、JCV感染により生じるJCV増幅関連因子の変化を解析した。その結果、1)JCVの増幅は非神経系細胞では弱く、神経系細胞で強いこと、2)JCV感染によりDNA複製因子の一つであるRPA(Replication Protein A)、およびp53がリン酸化されること、3)JCV Large TはDNA dependent protein kinase(DNA-PK)の抑制を介してRPA、p53の脱リン酸化を亢進させることが明らかとなった。さらに、PML患者脳を用いた免疫組織化学的解析により、JCVが感染しているoligodendrocyteでのみ、RPAが核内に凝集していることを新たに見出した。以上の結果、JCV感染を抑制する細胞側の応答とそれをウイルスタンパクが減弱させる一連の反応を分子レベルで明らかにすることができた。

The cause of PML (Progressive Polymorphic Linear Syndrome) is due to the presence of JCVs (JCV) and Tissue-specific replicators. This study focuses on the analysis of JCV's neuroaffinity and its mechanism of amplification. Methods: Since the replication of JCV must be carried out by utilizing replication factors on the full site side in addition to the Large T in the early stage of JCV infection, the recombinant JCV Large T, S100 cell extract, and JCV must have been established in the vitro JCV amplification system, and the changes in JCV growth related factors that contribute to JCV infection were analyzed. The results showed that 1)JCV was weak in non-neurologic cells and strong in neurologic cells, 2)JCV infection was associated with DNA replication factor RPA(Replication Protein A), p53 and p53 and 3)JCV Large T mediated DNA dependent protein kinase(DNA-PK) inhibition and p53 and p53 deacidification. In addition, PML patients were treated with immunohistochemical analysis, JCV infection, oligodendrocyte, RPA and nuclear aggregation. These results suggest that JCV infection can be inhibited by cellular responses, which can be reduced by molecular responses.