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植物病原糸状菌の遺伝子水平移行に関わる染色体構造異常に関する分子細胞遺伝学的研究

植物病原真菌水平基因转移相关染色体结构异常的分子细胞遗传学研究

基本信息

批准号：
02J05906
负责人：
土屋大
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J05906/
关键词：
糸状菌染色体走査型電子顕微鏡クロマチン

项目摘要

植物病原糸状菌であるトウモロコシごま葉枯病菌(Cochliobolus heterostrophus)において推測されている遺伝子水平移行に関わる染色体構造異常に関して細胞学的な観点から解析することを目的として、糸状菌の体細胞染色体・核の走査電子顕微鏡(SEM)観察法を初めて確立し,クロマチンレベルでの高解像度観察を行った。今回確立した観察法は、発芽管破裂法でスライドガラス上に染色体・核の標本を作製、導電染色法としてオスミウム-チオカルボヒドラジド-オスミウム法またはオスミウム-タンニン-オスミウム法を用い、t-ブチルアルコール凍結乾燥,5nmでの白金コーティング後,電界放射型SEMで観察するというものである。得られた体細胞分裂中期染色体像は、動植物の場合と同様に棍棒状を呈し,主に高度に凝縮した30-50nmのクロマチン基本繊維および染色体マトリクスから構成されていた。また、クロマチン繊維表面には動植物と同様にこぶ状の染色小粒も確認できた。しかし、動植物の染色体では顕著に出現する動原体狭窄部および姉妹染色分体は、染色体のサイズが小さすぎるためこの領域がクロマチンに覆われ、大半の染色体で観察されなかった。最小と最大染色体の平均長軸はそれぞれ1.3,μm,1.5μmで,両者のサイズ比(1:2.7)は標本間でほぼ一定であった。間期核はおおよそ球状で,核小体と推定される空洞領域を有し,10-50nmのクロマチンおよび核マトリクスから成る繊維状構造であった。今回核で確認された10-20nmのクロマチンはヌクレオソームの基本繊維、染色体および核の30-50nm繊維はクロマチンの基本繊維であるソレノイドに対応すると考えられる。以上の結果から、菌類染色体は動植物染色体と三次元構造は酷似しており、基本繊維のサイズもほぼ同じであることが明らかとなった。これまでに菌類体細胞染色体・核のSEM観察例はなく、本研究によって初めて菌類の染色体・核の三次元構造が明らかにされた。現在、この手法を利用したSEMによるin situハイブリダイゼーション法を確立中である。

The study of chromosome and nucleus in somatic cells of plant pathogenic bacteria Cochliobolus heterotrophus was initially established by electron microscopy (SEM), and high-resolution observation was carried out. This paper establishes the method of observation, germ tube rupture, chromosome preparation, conductivity staining, and electron microscopy. After freeze drying,5nm platinum is observed by SEM. The metaphase chromosomes of somatic cells are condensed into 30-50nm in the same way as those of animals and plants. The color of the plant and animal is similar to that of the pigment. The chromosomes of animals and plants are not found in the narrow part of the chromosome. The chromosomes are not found in the small part of the chromosome. Most of the chromosomes are found in the small part of the chromosome. The average long axis of the smallest and largest chromosomes is 1.3,μ m, 1.5 μm, and the ratio of the smallest and largest chromosomes is (1:2.7). The nucleosomes are presumed to be spherical in size, and the nucleosomes are presumed to be hollow in size, 10 -50nm. The present study confirms that the 10-20nm chromosome is the basic chromosome of the chromosome, and the 30-50nm chromosome is the basic chromosome of the chromosome. The above results show that the fungal chromosomes are similar to the three-dimensional structure of the plant and animal chromosomes. The chromosome and nuclear structure of somatic cells of fungi were observed by SEM. In this study, the chromosome and nuclear structure of somatic cells of fungi were analyzed. Now, this method is established by SEM.